ATCC（NR8383細胞）大鼠肺泡巨噬細胞

時間：2020-01-05作者：安徽青志生物科技有限公司瀏覽：308

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培養(yǎng)ATCC CRL-2192（NR8383細胞）大鼠肺泡巨噬細胞的一般過程，包括準備工作，培養(yǎng)，凍存及復蘇，常用儀器設備以及所有注意事項。

? 一、準備工作 準備工作對開展細胞培養(yǎng)是重要的，工作量也較大，應給予足夠的重視呢。準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或**凈臺的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調試。

? 二、培養(yǎng) 細胞培養(yǎng)呢，一般應在接入培養(yǎng)器皿之前進行細胞計數(shù)，按要求以一定的量（以每毫升細胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細胞進入培養(yǎng)器皿后，立即放入培養(yǎng)箱中，使細胞盡早進入生長狀態(tài)。 正在培養(yǎng)中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態(tài)是否正常，有無污染，培養(yǎng)基的PH是否太酸或太堿（由紅指示劑指示），此外對培養(yǎng)溫度和CO2濃度也要定時檢查。 原代培養(yǎng)一般有一段潛伏期（數(shù)小時到數(shù)十天不等），在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和游走。過了潛伏期后細胞進入旺盛的分裂生長期。細胞長滿瓶底后要進行傳代培養(yǎng)，將一瓶中的細胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng)。每傳代一次稱為“一代”。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅有不死性而無惡性。

? 三、凍存及復蘇 為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，是要將細胞凍存的哦。凍存的溫度一般用的溫度－196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，較終保存于中。在較低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。復蘇一般采用快融方法，即從中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內*融解。然后將細胞轉入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)。 凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復蘇時溫度、融化速度等對細胞活力都是會有影響的。

? 四、常用儀器設備 無菌室,**凈工作臺,三重純水蒸餾器,抽氣泵,壓力蒸氣消毒器,電熱恒溫培養(yǎng)箱,培養(yǎng)器具，CO2培養(yǎng)箱,恒溫水浴鍋,倒置顯微鏡,離心機,無菌過濾器,洗刷裝置,細胞計數(shù)板和電子細胞技術儀等等。

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