賽析推出STI501色譜儀動(dòng)物產(chǎn)品中獸藥殘留的快檢方法

時(shí)間：2013-04-23作者：杭州賽析科技有限公司瀏覽：123

 

一、前言：

1、             現(xiàn)狀

目前獸醫(yī)用藥幾乎占據(jù)了所有抗微生物藥物的50%，因此食品病原菌、條件致病菌和共生菌不可避免的成了耐藥菌。在過去的50年*約有100萬噸的抗生素被釋放到生物圈中。歐洲動(dòng)物衛(wèi)生聯(lián)盟（European Federation of Animal Health ，FEDESA）對歐盟和瑞士抗生素使用統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，僅1997年用于人類健康的抗生素達(dá)5460噸，用于動(dòng)物健康的抗生素達(dá)3465噸，用于動(dòng)物生長促進(jìn)劑的抗生素達(dá)1575噸，并有逐年增加的趨勢。

在我國，由于獸醫(yī)用藥制度的不完善及一些養(yǎng)殖廠受經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使及相應(yīng)的檢測監(jiān)督體系不健全，藥物的濫用現(xiàn)象較為嚴(yán)重，動(dòng)物產(chǎn)品中獸藥的污染時(shí)有發(fā)生。其潛在的致癌、致畸作用引起了社會(huì)的普遍關(guān)注，由于水產(chǎn)品中氯霉素含量過高，歐盟**于今年1月作出禁止中國動(dòng)物源食品進(jìn)口的協(xié)議，使得我國水產(chǎn)品對歐盟出口嚴(yán)重受挫，雖然現(xiàn)在部分產(chǎn)品開始解禁，但形式依然不容樂觀；美國、日本等國也開始高度關(guān)注我國水產(chǎn)品的質(zhì)量，并出臺一系列相關(guān)政策，對我國出口動(dòng)物性產(chǎn)品進(jìn)行限制。在現(xiàn)代文明的世界，健康**的貿(mào)易法則將是關(guān)稅、價(jià)格、質(zhì)量所不可比擬的，政治上的友好往來無法替代經(jīng)濟(jì)貿(mào)易中的游戲規(guī)則。

2、食品中獸藥殘留對人類的危害

2.1耐藥菌株的產(chǎn)生

抗生素使用和細(xì)菌耐藥性永遠(yuǎn)是互相依存、互相制約的矛盾的兩個(gè)方面，細(xì)菌耐藥非正常增加，往往是抗生素的非正常使用的結(jié)果。早在1920-30年青霉素問世時(shí)，Dr Fleming就提出了青霉素的耐藥性問題。隨著時(shí)代的發(fā)展和各種新藥的出現(xiàn)，耐藥性菌株也接踵而至（即包括藥物選擇壓力的結(jié)果也包括細(xì)菌自身的進(jìn)化）?？股氐母弊饔靡约澳退幘甑拇嬖趯?yán)重威脅著人類的健康，而且臨床亞**水平的抗生素較*促使抗性基因的轉(zhuǎn)移，比如對動(dòng)物進(jìn)行低水平四環(huán)素**，其糞腸菌群由對四環(huán)素敏感逐漸變成抗四環(huán)素最后發(fā)展成對其它藥物也產(chǎn)生抗性。在長期的生活中，恰恰是人類和動(dòng)物腸道的正常菌群成了耐藥基因的儲存庫，并不斷的將耐藥基因轉(zhuǎn)移給致病菌，并在人和動(dòng)物中交叉?zhèn)鞑?，尤其是釋放到環(huán)境中耐藥菌的危害較為嚴(yán)重，可造成耐藥基因的*轉(zhuǎn)移。

2.2抗生素的毒副作用

殘留在動(dòng)物性食品中的抗生素被人們食用后，除了加速人體內(nèi)耐藥菌株的進(jìn)化之外，抗生素本身的毒副作用往往威脅人類尤其是孕婦和嬰兒的健康，這一點(diǎn)在過去往往很*被忽視。

2.2.1氯霉素

主要由Streptomyces venezuelae產(chǎn)生，目前已能人工合成。它能抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)生物合成，其效應(yīng)部位位于核糖體上，因而對大多數(shù)G+菌和G－菌都有殺傷力。氯霉素的毒副作用較多，其常見的是再生障礙貧血、造血功能紊亂、灰嬰綜合征、肢體感覺和運(yùn)動(dòng)障礙及休克。雖然氯霉素在動(dòng)物疾病防治上曾發(fā)揮過一定的作用，但由于氯霉素可以產(chǎn)生致命性的副作用，因此歐盟已經(jīng)在畜牧、水產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)中禁止使用。

2.2.2b－內(nèi)酰胺

b－內(nèi)酰胺類抗生素通過抑制細(xì)菌轉(zhuǎn)肽酶的活性而干擾細(xì)胞壁肽聚糖的合成，安芐青霉素和青霉素G是該類較常見的兩種化合物，由Penicillium chrysogenum產(chǎn)生。它可以通過胎盤傳給胎兒，也能通過乳腺進(jìn)入乳中。較常見的副作用是以皮膚出現(xiàn)紅斑為主要癥狀的過敏反應(yīng)以及胃腸道紊亂引起的腹瀉、惡心和嘔吐。

2.2.3四環(huán)素

包括Oxytetracycline （土霉素，OTC）、tetracycline （四環(huán)素，TC）、 chlortetracycline （金霉素，CTC） 和doxycycline （強(qiáng)力霉素，DC）等。

2.2.4  b－興奮劑

        為擬交感神經(jīng)類藥物，該類興奮劑的受體為b2受體故得名。該類興奮劑可以促使肌肉骨骼肌血管壁擴(kuò)張、支氣管和子宮平滑肌松弛。因而在獸醫(yī)臨床上b2興奮劑被廣泛用作支氣管擴(kuò)張藥和子宮松弛藥，同時(shí)也被非法用作動(dòng)物營養(yǎng)再分配的促生長劑。副作用，如：焦躁、震顫、過敏、神智不清、食欲不振、惡心和嘔吐等以及心悸、高血壓、心律失常、心動(dòng)過速等心血管癥狀，其中擬交感神經(jīng)類物質(zhì)在組織中的溢出均可導(dǎo)致組織壞死。

2.2.5雌激素

是一種人工合成的非固醇類雌激素，主要用于**婦科紊亂、乳房和**腺惡性**，為一種致癌物質(zhì)；在肝臟中代謝緩慢，較終能隨尿和糞便排出。副作用包括：水腫、引起性欲沖動(dòng)、改變月經(jīng)周期、乳房異常發(fā)育、肝功能改變、胃腸道紊亂、衰竭、頭痛、皮膚紅斑、風(fēng)疹。對于雄性動(dòng)物來說，大劑量的雌激素可以增加血管栓塞的危險(xiǎn)。此外，雌激素還能引起子宮內(nèi)膜增生，使患子宮癌的頻率增加。大劑量使用雌激素還可以導(dǎo)致骨骼發(fā)育閉合，停止生長。也能促使生殖道變形，對于雄性動(dòng)物能使精子變形以及嘔吐等。

2.2.6氨基甙類抗生素

主要包括慶大霉素、鏈霉素、新霉素、卡那霉素等，為以氨基環(huán)醇和氨基糖相連成核糖單位的多價(jià)陽離子復(fù)合物。氨基甙類通過與細(xì)菌核糖體不可逆結(jié)合而干擾細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞膜塌陷。氨基甙類藥物的主要副作用是對聽覺器官和腎的毒性、過敏反應(yīng)以及對神經(jīng)肌肉的影響。其中，慶大霉素能引起肝功紊亂、外周和**神經(jīng)炎（包括腦炎、呆滯、抽搐）；鏈霉素能導(dǎo)致神經(jīng)紊亂，包括視覺神經(jīng)炎和外周神經(jīng)炎，以及嚴(yán)重的皮炎、過敏等**敏感反應(yīng)。

二、獸藥殘留的**檢測方法

目前**上對抗生素和激素類藥物殘留的檢測主要有儀器分析法（包括HPLC和GC-MS）和生物學(xué)**檢測法（如：ELISA、RIA、CharmⅡ等）。其中，儀器分析法既要求儀器設(shè)備具有相當(dāng)高的精度，也要求技術(shù)人員具有一定的操作和分析技能。作為儀器分析法，其昂貴的價(jià)格和軟件較新的緩慢以及操作上的煩瑣限制了此法的推廣；但由于檢測的靈敏度可以達(dá)到ng水平，在一些地區(qū)大型實(shí)驗(yàn)室里仍作為檢驗(yàn)的參考依據(jù)使用。而生物學(xué)**檢測法由于其操作上的簡便、**以及達(dá)到ng水平的靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，以成為動(dòng)物產(chǎn)品中獸藥殘留檢測的一種重要手段。尤其是ELISA（酶聯(lián)*吸附試驗(yàn)）和CharmⅡ，其操作上的簡便、**和強(qiáng)烈的信噪比、達(dá)到ng水平的靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，其缺陷在于該法會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果，但做為一種**篩選方法備受技術(shù)人員的青睞，在檢測部門有著廣泛的應(yīng)用前景。

  不同的ELISA原理直接影響其檢測下限、特異性及結(jié)果的計(jì)算。

樣品的前處理

不同樣品有其特定的前處理方法，主要有以下幾種：

**物抽提法：（氯霉素）

利用藥物在**物中的溶解性，達(dá)到分離純化的目的

樣品均質(zhì)         稱量      乙晴和或乙酸乙酯抽提       離心      吹干

      異辛烷/氯仿或正己烷抽提     離心      取水相分析

離子交換法（如：C18過柱法）（鏈霉素）

離子交換是利用一些帶離子基團(tuán)的物質(zhì)，吸附交換帶相反電荷的蛋白質(zhì)，將蛋白質(zhì)按所帶電荷不同或量的差異分成不同的組分。

樣品稱量      溶解     上柱

C18柱平衡                 洗柱      吸柱干燥     洗提      吹干

緩沖液重懸      分析

（*）親和層析（雌激素）

   利用生物大分子的生物學(xué)特性而設(shè)計(jì)的層析分離技術(shù)，如利用抗原和抗體、酶和酶的抑制物或配體、激素和受體等之間的親和力，在一定條件下，兩者可緊密結(jié)合形成復(fù)合物，若將其中一者固定在載體上，則可從溶液中提取和分離相應(yīng)的另一方，并達(dá)到很高的純度。現(xiàn)有商品化生產(chǎn)，（方便，減少裝柱等繁瑣步驟）其操作步驟與上者相似，可以按照試劑盒提供的步驟進(jìn)行。

 檢測原理

   微生物受體*分析法，屬于*分析法的一種，其建立的基礎(chǔ)是藥物功能團(tuán)與微生物受體位點(diǎn)的結(jié)合反應(yīng)。在某些方面類似于放射*分析（RIA），所不同的是RIA使用抗體作為結(jié)合劑，而受體分析則是使用細(xì)菌細(xì)胞的固定位點(diǎn)當(dāng)做特殊的結(jié)合劑。

    一個(gè)單一的細(xì)菌細(xì)胞含有可結(jié)合藥物的特殊結(jié)合位點(diǎn)，藥物和受體位點(diǎn)的結(jié)合反應(yīng)離解常數(shù)低，因而具特異性和靈敏性。對于該法具體原理Charm公司未有詳細(xì)深入的報(bào)道（商業(yè)方面考慮），主要是利用兩種不同的細(xì)菌提供7大類抗生素結(jié)合的**位點(diǎn)，藥物的功能團(tuán)與位點(diǎn)有關(guān)，不象*分析只涉及到側(cè)鏈，一種微生物受體可結(jié)合一類藥物的所有藥物。

象ELISA類似，這種結(jié)合也是一種競爭結(jié)合。在試管中加入一定量的細(xì)菌（受體）、放射性標(biāo)記藥物和樣品，樣品中的藥物和放射性標(biāo)記藥物競爭結(jié)合受體，未于受體位點(diǎn)結(jié)合的標(biāo)記性藥物在讀數(shù)前被去掉，加入閃爍液，在分析儀上讀數(shù)。

檢測的一般程序

準(zhǔn)備工作：**按說明書配制好所需的提取緩沖液、M2緩沖液、陰性對照和陽性對照。

儀器零點(diǎn)測定：用空試管測定儀器的零點(diǎn)是否正常。

試劑和儀器有效性確認(rèn)：檢測陰性對照液和陽性對照液各3次，求出cpm值的平均值，與出廠的計(jì)數(shù)單對比，較好能在其±10%左右波動(dòng)。如果與計(jì)數(shù)單相比偏移較大，試劑可能部分失效，但只要陽性平均值/陰性平均值小于0.7，試劑仍然可用，但靈敏度會(huì)有所降低。

控制點(diǎn)的確定：控制點(diǎn)是陰性結(jié)果與陽性結(jié)果的臨界值。利用控制點(diǎn)來判斷結(jié)果。有兩種確定控制點(diǎn)的方法：根據(jù)樣品的種類或檢測水平選擇適當(dāng)?shù)目刂泣c(diǎn)確定方法?？刂泣c(diǎn)確定方法有二。有些說明書上兩種方法都列出，用戶可根據(jù)需要選擇，較好選*二種。

方法一：直接以陰性對照來確定控制點(diǎn)，一般樣品干擾小或接近儀器的下**，采用這種方法，只需再做3次，與前3次試劑性能確認(rèn)的結(jié)果一起求平均值，然后減法X%，即為控制點(diǎn)。X為變數(shù)，由廠家用定量方法校準(zhǔn)。

方法二：以空白加標(biāo)樣品來確定控制點(diǎn)。這種方法的關(guān)鍵是找到陰性樣品，如果沒有其它的定量方法找陰性樣品，可根據(jù)陰性對照平均值來找陰性樣品（陰性對照平均值±X%）。用此陰性樣品，按檢測水平和稀釋倍數(shù)，加抗生素標(biāo)準(zhǔn)品，用此空白加標(biāo)樣品，測定6次CPM值，求平均值，控制點(diǎn)＝平均值＊（1＋20%）。

測定實(shí)際樣品

前處理：不同的樣品具不同的前處理方法，一般尿樣、血清、血漿等只需用緩沖液稀釋即可，而組織樣品則需均質(zhì)、提取、孵育等過程，對于蜂蜜等一些樣品則要過柱?？偟膩碚f，前處理要比ELISA較簡便、**。

按照操作說明檢測結(jié)合試劑片加入試管；加入300微升水混均；加入處理過的樣品；加入標(biāo)記性藥物，混合；孵育；離心，棄去上清液；加水混均；加閃爍液，混均；讀數(shù)。

三、實(shí)驗(yàn)室分析質(zhì)量控制

涉及儀器的校正、過程控制、標(biāo)準(zhǔn)物控制、環(huán)境、實(shí)驗(yàn)室管理（監(jiān)控所進(jìn)行的測試及記錄結(jié)果，以便發(fā)現(xiàn)發(fā)展趨勢，統(tǒng)計(jì)技術(shù)進(jìn)行結(jié)果評審）

1、**篩選方法及定性方法

選擇性：檢出目的物質(zhì)的能力；

靈敏性：樣品中檢出這種藥物真正陽性結(jié)果的比率；

準(zhǔn)確性：所得值和真實(shí)值的一致性，用不確定度來衡量——重復(fù)多次測定值和真實(shí)值之差；

檢測限：分析方法能從樣品背景信號中檢測出待檢物質(zhì)的較低濃度；

重復(fù)性：

2、定量方法的附加要求

回收率：

定量限：分析方法能對樣品中待檢物質(zhì)進(jìn)行定量檢測的較低濃度，反映該方法在低濃度端分析結(jié)果的**性；

精密度：對同一樣品重復(fù)測定，每次測定值和均值的接近程度，主要反映隨機(jī)誤差；

重復(fù)性：批內(nèi)重復(fù)、批間重復(fù)線形范圍：曲線的擬和

更多檢測方案，可來電咨詢0571-87962118

或直接登錄網(wǎng)站查詢  


杭州賽析科技有限公司專注于色譜儀器,液相色譜儀,色譜工作站,色譜配件,水分測定儀,分析儀器等

• 詞條

  詞條說明

• 賽析推出STI501液相色譜(HPLC)紡織品中游離甲醛的測定

  ? ·?甲醛是一種無色，有強(qiáng)烈刺激性氣味的氣體，易燃，液態(tài)甲醛屬低毒物質(zhì)，其蒸氣能強(qiáng)烈刺激粘膜、具有致癌性、屬于高毒物。紡織品、服裝、家紡頻爆甲醛**標(biāo)，直接危害公眾切身利益。8月起，我國實(shí)行了紡織服裝新標(biāo)準(zhǔn)，對部分有毒有害物質(zhì)進(jìn)行了修改。地區(qū)標(biāo)準(zhǔn)是為了防止有害物質(zhì)**標(biāo)，但許多不法企業(yè)依然存僥幸心理，頻頻被查出。儀器信息網(wǎng)推出紡織品中甲醛的測定應(yīng)用專題，收集了甲醛測定相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)

• 賽析推出STI501液相色譜柱后光照衍生法測定黃曲霉毒素-市場篇

  ? 方案優(yōu)勢 食品、飼料中黃曲霉毒素檢測的地區(qū)標(biāo)準(zhǔn)中有采用柱后試劑衍生液相色譜熒光法、柱前衍生液相色譜熒光法、酶聯(lián)*吸附法、薄層法，其中柱后試劑衍生法操作麻煩、柱前衍生法重現(xiàn)性差等問題，采用柱后光照衍生液相色譜熒光法，具有操作簡單、靈敏度高等特點(diǎn)，適合大量樣品常規(guī)分析。 【檢測項(xiàng)目】乳品及乳制 【檢測樣品】黃曲霉毒素 分析設(shè)備 賽析*液相色譜儀STI501 產(chǎn)品型號：STI501 較

• 賽析科技推出STI501*液相色譜(HPLC)檢測飼料中維生素的解決方案

  ? 方案優(yōu)勢 根據(jù)*1849號公告，公布了《飼料生產(chǎn)企業(yè)許可條件》和《混合型飼料添加劑生產(chǎn)企業(yè)許可條件》，兩許可條件自2012年12月1日起施行。我公司推出一款高性價(jià)比的STI501型*液相色譜儀用于檢測飼料中的維生素含量，STI501型*液相色譜儀產(chǎn)品質(zhì)量**，檢測線低，重復(fù)性好，價(jià)格低廉，可滿足飼料行業(yè)對配合飼料、濃縮飼料、復(fù)合預(yù)混合飼料中多種維生素和添加劑的含量檢測。 【

• 賽析推出STI501*液相色譜(HPLC)測定奶粉和牛奶中八種糖含量

  ? ?方案優(yōu)勢 本方法建立了用賽稀科技STI501系統(tǒng)檢測奶粉和牛奶實(shí)際樣品中Fructose（果糖）、Sorbose（山梨糖）、Glucose（葡萄糖）、Sucrose（蔗糖）、Maltose（麥芽糖）、Lactose（乳糖）、Maltotriose（麥芽三糖）、Maltotetraose（麥芽四糖）8種常見糖的的定量分析方法。方法的檢出限為有6種糖達(dá)到5μg/g，兩外兩種糖