奧林巴斯熒光激發(fā)塊的組成結(jié)構(gòu)

    應(yīng)用于熒光濾光片的術(shù)語(yǔ)由于不同制造商用于識(shí)別其濾光片的各種首字母而變得混亂。在這個(gè)討論中,我們?cè)噲D對(duì)這個(gè)令人困惑的術(shù)語(yǔ)做出一些順序。基本上有三類濾波器需要分類:激發(fā)濾光片,屏障濾波器和二色分光鏡(二向色鏡)通常組合起來(lái)產(chǎn)生類似于圖1所示的濾波器激發(fā)塊。正確選擇濾波器是關(guān)鍵成功的熒光顯微鏡。

    激發(fā)濾光片僅允許來(lái)自照明器的選定波長(zhǎng)在朝向樣本的途中通過(guò)。屏障濾光片是設(shè)計(jì)用于抑制或阻擋(吸收)激發(fā)波長(zhǎng)并僅允許選定的**波長(zhǎng)通過(guò)眼睛或其他檢測(cè)器的濾光片。二色分光鏡(二向色鏡)是專門的濾光器,設(shè)計(jì)用于有效地反射激發(fā)波長(zhǎng)并通過(guò)**波長(zhǎng)。它們用于反射光熒光照明器,并且位于激勵(lì)濾光器之后但在屏障濾光器之前的光路中。二色分束器與穿過(guò)激發(fā)濾光器的光成45度角,與屏障濾光器成45度角,如圖1所示。

    熒光濾光器以前幾乎完全由夾在玻璃之間的彩色玻璃或彩色明膠制成。由于較復(fù)雜的濾波器技術(shù),已經(jīng)開發(fā)出干涉濾光器,其由玻璃上的介電涂層(具有不同的折射率和反射率)組成。這些濾波器設(shè)計(jì)用于通過(guò)或抑制光的波長(zhǎng),具有很高的選擇性和高透射率。今天的大多數(shù)激發(fā)濾光片都是干涉型; 對(duì)于特殊需要,一些屏障濾波器也是干擾類型。二色分束器是**的干涉濾光器。有時(shí),短通濾波器(SP)和長(zhǎng)通(LP)濾波器被組合以縮窄通過(guò)這種組合的波長(zhǎng)帶。(圖3(c))

    激發(fā)濾光片 - 制造商用來(lái)表示濾波器特性的縮寫包括:UG(紫外線玻璃)和BG(藍(lán)色玻璃),它們是玻璃激發(fā)濾光片。KP(K是kurz的縮寫,德語(yǔ)為short),SP是短通濾波器;和EX表示激發(fā)濾光片。

    今天,大多數(shù)激發(fā)濾光片都是干涉型。KP或SP濾波器的透射曲線在曲線的右側(cè)顯示出急劇下降,如圖2(a)所示。如果激發(fā)濾光片標(biāo)有字母B或BP,則它是帶通濾波器(圖3)。(a)BP濾波器是具有波長(zhǎng)截止兩者的左側(cè)和其曲線的右側(cè)的過(guò)濾器(參照?qǐng)D3(a)和3(b))。與這些濾波器相關(guān)聯(lián)的數(shù)字可以指帶通激發(fā)濾光片的較大傳輸波長(zhǎng)。對(duì)于SP或KP濾波器的數(shù)量可以指較大傳輸?shù)?0%的波長(zhǎng)。對(duì)于帶通濾波器,有時(shí)會(huì)規(guī)定在較大傳輸?shù)?0%水平下的納米帶寬。帶通濾波器被設(shè)計(jì)成僅通過(guò)所需的波長(zhǎng)譜帶; 許多干擾帶通濾波器通過(guò)一個(gè)窄帶頻譜。一些制造商將其干涉濾光片標(biāo)記為IF。如果Stokes的移位很小,窄干擾帶通濾波器特別有用。

    屏障過(guò)濾器 - 屏障過(guò)濾器的縮略語(yǔ)或縮寫包括:用于長(zhǎng)通濾波器的LP或L,用于黃色或gelb(德國(guó))玻璃的Y或GG,用于紅色玻璃的R或RG,用于橙色玻璃的OG或O,用于kante的K,a邊緣(濾波器)的德語(yǔ)術(shù)語(yǔ),屏障濾波器的BA。

    屏障濾波器阻擋(抑制)較短波長(zhǎng),并且對(duì)較長(zhǎng)波長(zhǎng)具有高透射率。當(dāng)濾波器類型也與數(shù)字相關(guān)聯(lián)時(shí),例如BA475,該*是指在其較大透射率的50%處的波長(zhǎng)(以納米為單位)。屏障濾光片的曲線通常在左側(cè)顯示銳利邊緣,表明該邊緣左側(cè)的波長(zhǎng)阻擋(見圖2(b))?,F(xiàn)代屏障濾波器通常是干涉型,其中許多是在傳輸曲線的左側(cè)和右側(cè)具有銳截止的帶通,如下面圖3所示。

    雙色分束鏡 - 用于描述和識(shí)別分束器的縮寫詞是:用于彩色分光鏡的CBS,用于分色鏡的DM,用于“teiler kante”的TK,用于邊緣分離器的德語(yǔ),用于“farb teiler”的FT,用于分色器的德語(yǔ)和RKP反射短傳。所有這些術(shù)語(yǔ)都應(yīng)視為可互換的。

    這些濾波器始終是干涉類型。涂層設(shè)計(jì)為對(duì)較短波長(zhǎng)具有高反射率,對(duì)較長(zhǎng)波長(zhǎng)具有高透射率。二色分束器以與通過(guò)反射光熒光照明器進(jìn)入激發(fā)塊的激發(fā)光的路徑成45度角定向。它們的功能是將選定的激發(fā)(較短波長(zhǎng))光通過(guò)物鏡并導(dǎo)向樣品。它們還具有將較長(zhǎng)波長(zhǎng)的光傳遞到屏障濾光器并將任何散射的激發(fā)光反射回?zé)粝浞较虻母郊庸δ堋?/p>

    在許多當(dāng)前的反射光熒光照明器中,激勵(lì)器濾光器,二向色鏡和屏障濾光器都被結(jié)合到單個(gè)激發(fā)塊中,如圖1和6所示。照明器可以通過(guò)滑塊或旋轉(zhuǎn)裝置,包含多達(dá)三個(gè)或四個(gè)激發(fā)塊,從而使用戶可以方便地使用各種規(guī)格的熒光染料。替代的激發(fā)劑和屏障可以容易地附著以優(yōu)化某些熒光染料的激發(fā)或**波長(zhǎng)。標(biāo)準(zhǔn)的激發(fā)濾光片和屏障濾波器是用戶可拆卸的,因此定制的濾波器也可以安裝在顯微鏡中。

    通常,燈殼包含紅外線或熱過(guò)濾器以保護(hù)熒光濾光器免受熱劣化。一些發(fā)光器可以包含或接受紅色抑制濾光器(*為BG38)以消除與一些濾光器組合相關(guān)聯(lián)的視場(chǎng)背景的變紅。而且,發(fā)光器可以接受中性密度濾光器和/或具有不透明的光閘,以減少或暫時(shí)阻擋光到達(dá)樣品。

    建議您詢問(wèn)制造商他們?cè)诿妥R(shí)別特定過(guò)濾器時(shí)使用的程序。用于Olympus熒光顯微鏡的這種命名法樣品在我們的數(shù)據(jù)表中給出,但是您應(yīng)該記住制造商的命名規(guī)則不同。顯微鏡公司可以為其激勵(lì)器和屏障濾光器及其二向色鏡提供傳輸曲線。截至1998年7月,這些信息并未在主要制造商的網(wǎng)站上提供,但我們將在可用時(shí)提供鏈接。

    用于藍(lán)色激發(fā)的激發(fā)塊 - 為了理解激發(fā)塊的功能,我們以藍(lán)色激發(fā)的常用激發(fā)塊為例。這個(gè)激發(fā)塊(使用U-URA照明器的Olympus名稱)是U-MWB激發(fā)塊。該U形MWB激發(fā)塊具有一個(gè)帶通450-480激勵(lì)器過(guò)濾器,如在圖4(a)所示。這種*意味著高百分比的激發(fā)光的波長(zhǎng)在450和480納米之間。這個(gè)激發(fā)塊中的二向色鏡是DM500因?yàn)?00納米的波長(zhǎng)是這個(gè)鏡子較大透射率的50%。該鏡子的透射率曲線顯示500nm以上的高透射率,500納米左側(cè)的透射率急劇下降,左側(cè)500nm的較大反射率,但仍可能有500nm以下的透射率。這個(gè)激發(fā)塊中的屏障濾光片是BA515,其陡峭的斜率**515納米,因此在515以下通過(guò)很少的光.BA515是一個(gè)長(zhǎng)通濾光片,它可以將高比例的波長(zhǎng)從綠色傳輸?shù)?15以上。遠(yuǎn)紅(圖4(a))。

    如果您希望縮小藍(lán)色激發(fā)的激發(fā)帶,可以選擇U-MWIB激發(fā)塊。該激發(fā)塊具有干涉激發(fā)濾光器(激發(fā)帶兩側(cè)非常尖銳的斜面)BP460,二向色鏡DM505和屏障長(zhǎng)通515IF(干涉屏障濾光器)。如圖4(b)所示,激勵(lì)器和屏障濾波器的尖銳斜率在激發(fā)和**波長(zhǎng)分離方面做得較好,重疊較小。

    如果您希望進(jìn)行藍(lán)色激發(fā),但希望限制穿過(guò)屏障濾波器的**波長(zhǎng),**綠色**,則可以選擇U-MWIBBP激發(fā)塊。該激發(fā)塊具有與U-MWIB激發(fā)塊相同的激勵(lì)器和二向色鏡,但作為其屏障濾波器,它具有帶通BA515-550(不是長(zhǎng)通濾波器)。該屏障濾光器僅使515-550nm之間的綠色波長(zhǎng)的光通過(guò),并阻擋550以上的較長(zhǎng)波長(zhǎng),并阻擋短于515nm的波長(zhǎng)(圖5(a))。

    還有其他用于藍(lán)色激發(fā)的激發(fā)塊,例如在我們的熒光激發(fā)塊數(shù)據(jù)表中與其他U-URA激發(fā)塊一起列出的U-MNIB和U-MNIBBP激發(fā)塊。如果顯微鏡制造商的激發(fā)塊都不符合您的需求,您將不得不去外部商業(yè)制造商用于定制濾光片和二向色鏡。大多數(shù)顯微鏡制造商現(xiàn)在生產(chǎn)的激發(fā)塊具有可拆卸的激勵(lì)器和屏障過(guò)濾器以及可拆卸的二向色鏡。激發(fā)塊的功能是采用激發(fā)濾光片來(lái)定制激發(fā)光到達(dá)熒光染料; 通過(guò)二向色鏡確保所需激發(fā)光的較大反射; 最后采用屏障濾光器來(lái)通過(guò)所需的**波長(zhǎng),同時(shí)阻擋不需要的激發(fā)光或特定的不需要的**波長(zhǎng)。

    IGS激發(fā)塊 - 除標(biāo)準(zhǔn)熒光激發(fā)塊外,制造商還可提供*金染色激發(fā)塊。這個(gè)激發(fā)塊代替二向色鏡,有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的半反射鏡,類似于冶金明場(chǎng)反射光顯微鏡中使用的那種。代替激發(fā)濾光片,定位長(zhǎng)通道420納米屏障濾光器(以阻擋420以下的光)和偏振濾光器,其定向?yàn)槭构鈨H在垂直于進(jìn)入激發(fā)塊的光的東西方向振動(dòng)。在激發(fā)塊上代替屏障過(guò)濾器,還有另一個(gè)偏振濾光器(用作分析儀),它只允許從南北向光路振動(dòng)的光線傳遞到眼睛或探測(cè)器。分析器可以相對(duì)于偏振器放置在不完全交叉的位置。

    多次染色 - 研究人員在進(jìn)行多次熒光染色時(shí)經(jīng)常遇到交叉問(wèn)題。例如,在使用異硫氰酸熒光素(FITC)和羅丹明綴合物的普通雙重染色中,激發(fā)藍(lán)色激發(fā)光FITC(綠色**)也可能引起羅丹明綴合物的激發(fā)(紅色**)。對(duì)于這種污漬組合,您可以嘗試使用U-MWIBBP激發(fā)塊。該激發(fā)塊具有460-490nm帶通激發(fā)濾波器,其將激發(fā)FITC。這個(gè)特殊激發(fā)塊的屏障濾波器不是長(zhǎng)通濾波器,而是515-550nm的帶通,它將限制**,到達(dá)眼睛或其他探測(cè)器,綠色波長(zhǎng),并將阻止羅丹明的紅色**。

    *二激發(fā)塊U-MNG具有帶通激發(fā)濾波器530-550,用于羅丹明綴合物的綠色激發(fā)。用于U-MNG激發(fā)塊的屏障過(guò)濾器是長(zhǎng)通BA590,其允許羅丹明的紅色**到達(dá)眼睛或其他檢測(cè)器(例如電影或視頻)并且將阻擋任何綠色**。

    通過(guò)交替旋轉(zhuǎn)U-MWIBBP激發(fā)塊和U-MNG激發(fā)塊進(jìn)入光路,您應(yīng)該能夠在雙染樣品中分離FITC的綠色**和羅丹明的紅色**。(圖5)類似地,對(duì)于多種熒光染料的其他組合,用戶必須知道熒光染料的激發(fā) - **光譜和顯微鏡制造商提供的激發(fā)塊的透射曲線。

    來(lái)自不同制造商的熒光激發(fā)塊外殼通常是不可互換的,并且限制在制造商提供的特定發(fā)光器內(nèi)使用。圖6中所示的激發(fā)塊顯示了目前可從Olympus獲得的幾種設(shè)計(jì)。應(yīng)該記住,有時(shí)可以調(diào)整一個(gè)制造商的激發(fā)塊中的各個(gè)元素(激發(fā)濾光片,屏障濾波器和二向色鏡)以適應(yīng)另一個(gè)制造商的激發(fā)塊。此任務(wù)由個(gè)人用戶通過(guò)反復(fù)試驗(yàn)確定。

    在某些情況下,可能需要尋找定制的過(guò)濾器(參見源的數(shù)據(jù)表)以確保所需的激發(fā)波長(zhǎng)和/或熒光**波長(zhǎng)的分離?,F(xiàn)在,一些商業(yè)資源還提供定制過(guò)濾器和二向色鏡,安裝在一個(gè)制造商提供的激發(fā)塊中,能夠處理雙色或三色熒光染色樣品而不會(huì)出現(xiàn)交叉問(wèn)題(例如,DAPI&FITC,DAPI和FITC) &TEXAS RED,pararosaniline&acriflavin等)



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  • 詞條

    詞條說(shuō)明

  • 奧林巴斯熒光激發(fā)塊的組成結(jié)構(gòu)

    應(yīng)用于熒光濾光片的術(shù)語(yǔ)由于不同制造商用于識(shí)別其濾光片的各種首字母而變得混亂。在這個(gè)討論中,我們?cè)噲D對(duì)這個(gè)令人困惑的術(shù)語(yǔ)做出一些順序?;旧嫌腥悶V波器需要分類:激發(fā)濾光片,屏障濾波器和二色分光鏡(二向色鏡)通常組合起來(lái)產(chǎn)生類似于圖1所示的濾波器激發(fā)塊。正確選擇濾波器是關(guān)鍵成功的熒光顯微鏡。激發(fā)濾光片僅允許來(lái)自照明器的選定波長(zhǎng)在朝向樣本的途中通過(guò)。屏障濾光片是設(shè)計(jì)用于抑制或阻擋(吸收)激發(fā)波長(zhǎng)并僅允

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