(一) 準備工作
1.在開始工作以前,要生物柜內(nèi)表面的污染。
2.將所有必需的物品置于柜內(nèi),以盡可能減少雙臂進出**開口的次數(shù)。物品放置要注意以下幾點:
①II級生物柜臺面**和后面的進氣格柵不能被物品阻擋。
②所有物品應盡可能地放在工作臺后部靠近工作臺邊緣的位置,并使其在操作中不會阻擋后部格柵。
③可產(chǎn)生氣溶膠的設備(如:混勻器、離心機等)應靠近柜的后部放置。有生物危害性的廢棄物袋、盛放廢棄吸管的盤子等體積較大的物品,應該放在柜內(nèi)的某一側。
④潔凈的物品應放置在距離產(chǎn)生氣溶膠器皿至少15 cm外,降低交叉污染的可能性。
⑤受紫外線損傷的實驗樣本可以在紫外線殺菌后的實驗之前放入。
⑥不要在工作區(qū)內(nèi)排放過多的物品。
3.關閉操作前窗,打開生物柜的紫外燈,對生物柜工作臺面,側壁表面以及后壁內(nèi)側進行殺菌處理。
4.稍微打開操作前窗,讓生物柜工作區(qū)排氣幾分鐘之后再開始工作。
(二) 操作注意事項
1.在使用生物柜時應穿著個體防護服并戴手套防止被污染。在進行一級和二級生物水平的操作時,可穿著普通實驗服。手套應套在實驗服袖口外面。有些操作可能還需要戴口罩和護目鏡。
2.在生物柜內(nèi),避免使用酒精燈等明火滅菌器。使用明火會對氣流產(chǎn)生影響,并且在處理揮發(fā)性物品和易燃物品時,也易造成危險。在對接種環(huán)進行滅菌時,可以使用紅外線電加熱器,或者干脆使用一次性塑料接種環(huán)。
3.手和雙臂伸入到生物柜中等待大約1min,以便柜調(diào)整完畢并且讓里面的空氣“掃過”手和雙臂的表面以后,才可以開始對物品進行處理。
4.工作時,盡量減少手臂的移動,移動時要緩慢,防止干擾柜內(nèi)氣流。在移動雙臂進出柜時,需要小心維持**開口處氣流的完整性,雙臂應該與工作區(qū)開口垂直地緩慢進出**的開口。
5.在工作臺面上的實驗操作應該按照從清潔區(qū)到污染區(qū)的方向進行,所有操作在工作臺面的中后部進行。
6.工作時,耐高壓滅菌的生物危害性廢棄物袋以及吸管盛放盤放在柜內(nèi)不能拿出柜,否則在使用這些物品時雙臂就頻繁進出柜,這樣會干擾柜空氣屏障的完整性,從而影響對人員和物品的防護。
7.一旦實驗過程中產(chǎn)生溢灑物,用消毒紙巾置于其表面吸附清理。
8.盡量使柜處于持續(xù)工作狀態(tài),并對所有物品進行表面消毒處理,提供大程度的人員保護。從柜內(nèi)部拿取可能產(chǎn)生污染的物品時,要進行表面消毒處理。
(三)使用完畢后的處理
1.系緊用過的生物廢物袋。
2.對柜內(nèi)壁、后壁、工作臺面和前窗內(nèi)側進行清潔和消毒處理。
3.由于剩余的培養(yǎng)基可能會使微生物生長繁殖,因此在實驗結束時,包括儀器設備在內(nèi)的所有物品都應表面污染,并移出柜。
4.從柜內(nèi)移出手臂之前,要進行表面消毒處理,然后垂直于工作區(qū)開口緩慢地移出。
6.在每次使用后,要生物柜內(nèi)表面的污染。工作臺面和內(nèi)壁要用消毒劑進行擦拭,所用的消毒劑要能夠殺死柜里的任何微生物。在每天實驗結束時,應擦拭生物柜的工作臺面、四周以及玻璃的內(nèi)外側等部位來表面的污染。在對目標生物體有效時,可以采用漂白劑溶液或70%酒精來消毒。在使用如漂白劑等腐蝕性消毒劑后,還用無菌水再次進行擦拭。
7.關閉前操作窗口并開啟紫外燈。
(四)生物柜內(nèi)溢灑的處理
處理溢灑物時不要將頭伸入柜內(nèi),也不要將臉直接面對前操作口,而應處于前視面板的后方。選擇消毒滅菌劑時需要考慮其對生物柜的腐蝕性。
如果溢灑的量不足1 ml時,可直接用消毒滅菌劑浸濕的紙巾(或其他材料)擦拭。
如果溢灑量大或容器破損,建議按如下操作:使生物柜保持開啟狀態(tài);在溢灑物上覆蓋浸有消毒滅菌劑的吸收材料,作用時間以發(fā)揮消毒滅菌作用,必要時,用消毒滅菌劑浸泡工作表面以及排水溝和接液槽;在柜內(nèi)對所戴手套消毒滅菌后,脫下手套;如果防護服已被污染,脫掉所污染的防護服后,用適當?shù)南緶缇鷦┣逑幢┞恫课唬淮┖眠m當?shù)膫€體防護裝備,如雙層手套、防護服、護目鏡和呼吸保護裝置等;小心將吸收了溢灑物的紙巾(或其他吸收材料)連同溢灑物收集到的收集袋或容器中,并反復用新的紙巾(或其他吸收材料)將剩余物質(zhì)吸凈;破碎的玻璃或其他銳器要用鑷子或鉗子處理;用消毒滅菌劑擦拭或噴灑柜內(nèi)壁、工作表面以及前視窗的內(nèi)側;作用時間后,用潔凈水擦干凈消毒滅菌劑;如果需要浸泡接液槽,在清理接液槽前要先報告主管人員;可能需要用其他方式消毒滅菌后再進行清理。如果溢灑物流入生物柜內(nèi)部,需要評估后采取適用的措施。
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