分光光度法是生物化學(xué)實驗中較常用的試驗方法。分光光度計是基于分光光度法,通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的儀器。紫外-可見分光光度計的類型很多,根據(jù)儀器結(jié)構(gòu)可分為單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計三種,其中單光束分光光度計和雙光束分光光度計屬于單波長分光光度計。 1.單光束分光光度計 從光源發(fā)出的光經(jīng)單色器分光后得到一束單色光,通過吸收池后,最后照射在檢測器上始終為一束光,如下圖所示。該類型的分光光度計結(jié)構(gòu)簡單、價格便宜,但由于其雜散光、光源波動等影響很大,所以準(zhǔn)確度較差。 2.雙光束分光光度計 從光源發(fā)出的復(fù)合光經(jīng)單色器分光后的單色光被反射鏡(切光器)分為強(qiáng)度相等的兩束光,分別通過參比溶液和樣品溶液,如下圖所示。由于兩束光同時通過參比溶液和樣品溶液,因此能夠自動消除光源強(qiáng)度變化所引起的誤差。雙光束分光光度計一般能自動記錄吸收光譜曲線,其靈敏度較好,但結(jié)構(gòu)較復(fù)雜、價格較貴。 3.雙波長分光光度計 由同一光源發(fā)出的光被分成兩束,分別經(jīng)過兩個單色器,得到兩束不同波長的單色光,再利用切光器使兩束不同波長的單色光以一定頻率交替照射同一溶液,然后再經(jīng)過光電倍增管和電子控制系統(tǒng),經(jīng)過信息處理最后得到兩波長處的吸光度的差值,如圖3-11所示。雙波長分光光度法一定程度地消除了背景干擾及共存組分的干擾,提高了分析的靈敏度。雙波長分光光度計不僅可用于多組分混合試樣的分析,還可以用于一般分光光度計不能測定的渾濁試樣(如生物組織液)的分析。 紫外分光光度計選型時,首先確定實驗是定性分析還是定量分析,同時被測樣品的狀態(tài)(液體、氣體、固體)也應(yīng)在考慮范圍內(nèi)。當(dāng)然,較主要的決定因素是不同型號之間的價格差異,在預(yù)算充足的情況下,選擇靈敏度好的分光光度計,一定會給實驗分析帶來事半功倍的效果。蘇州思普萊代理的日立分光光度計,整機(jī)日本進(jìn)口,配置多種類測量附件,是科研院校的可以選擇分光光度計品牌。
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分光光度法是生物化學(xué)實驗中較常用的試驗方法。分光光度計是基于分光光度法,通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的儀器。紫外-可見分光光度計的類型很多,根據(jù)儀器結(jié)構(gòu)可分為單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計三種,其中單光束分光光度計和雙光束分光光度計屬于單波長分光光度計。 1.單光束分光光度計 從光源發(fā)出的光經(jīng)單色器分光后得到一束單色光,通
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