血細(xì)胞計(jì)數(shù)原理
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中,細(xì)胞計(jì)數(shù)是一項(xiàng)基本功,對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)條件以及需要定量的實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)都關(guān)鍵。這里介紹使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)的經(jīng)典方法以及中間一些需要注意的細(xì)節(jié)。
制備細(xì)胞懸液:
對(duì)于貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,我們需要使用胰酶消化的方法使細(xì)胞從培養(yǎng)皿表面脫落
根據(jù)需要加入合適體積的培養(yǎng)基,將細(xì)胞進(jìn)行中和及稀釋,以得到均質(zhì)的細(xì)胞懸液。要求盡可能將細(xì)胞吹打散開,不要?dú)埩羧魏渭?xì)胞團(tuán)
準(zhǔn)備血細(xì)胞計(jì)數(shù)器:
使用70%乙醇將蓋玻片和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器清潔干凈
將將蓋玻片潤(rùn)濕(使用水或呼一口氣,目的是使蓋玻片與血細(xì)胞計(jì)數(shù)器接觸緊密,易于粘連),并覆蓋至血細(xì)胞計(jì)數(shù)器上
臺(tái)盼蘭染色(可選):
如果需要計(jì)算細(xì)胞的活力,則需要將細(xì)胞懸液和0.4%臺(tái)盼蘭等體積混合
室溫孵育3-5分鐘,使臺(tái)盼蘭進(jìn)入死細(xì)胞,使死細(xì)胞著藍(lán)色
血細(xì)胞計(jì)數(shù)器加樣:
使用吸管將細(xì)胞懸液或細(xì)胞/臺(tái)盼蘭混合液滴加到血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)池的邊緣。此時(shí)液滴將在虹吸的作用下進(jìn)入蓋玻片下方的計(jì)數(shù)池
以同樣的方式在另一側(cè)的計(jì)數(shù)池中也加入細(xì)胞懸液
將計(jì)數(shù)板放置幾分鐘使細(xì)胞擴(kuò)散,同時(shí)用吸水紙吸除多余的液體
細(xì)胞計(jì)數(shù):
在100倍顯微鏡下,移動(dòng)計(jì)數(shù)板將視野對(duì)準(zhǔn)計(jì)數(shù)板的*大方塊,該方塊四周有一圈3條平行線包圍,中間有密集的網(wǎng)格。*方塊區(qū)差不多剛好可以填滿整個(gè)視野
使用手持式計(jì)數(shù)器記錄計(jì)數(shù)池四個(gè)角以及*方塊內(nèi)的細(xì)胞數(shù)(1-5號(hào)位置,經(jīng)典的current-protocol推薦每個(gè)方塊細(xì)胞數(shù)應(yīng)不大于20-50),并重復(fù)記錄另一側(cè)計(jì)數(shù)池中的細(xì)胞數(shù),總計(jì)十個(gè)方塊。計(jì)數(shù)的方法是只計(jì)算上邊和左邊壓線的細(xì)胞,而右邊和下邊壓線的細(xì)胞不予計(jì)算(下圖,總體原則是“計(jì)上不計(jì)下,計(jì)左不計(jì)右”,判斷標(biāo)準(zhǔn)為是否接觸三條邊線的中間線)。如果有多個(gè)細(xì)胞沒(méi)有吹散成團(tuán)存在,此時(shí)只可記為一個(gè)細(xì)胞。如果團(tuán)塊很多,則可能需要重新吹打甚至消化直至絕大多數(shù)細(xì)胞為單個(gè)細(xì)胞
詞條
詞條說(shuō)明
山西太原科技大學(xué)一次性采購(gòu)川一30臺(tái)脂肪測(cè)定儀
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祝賀杭州川一品牌干式氮吹儀獲河北農(nóng)業(yè)大學(xué)認(rèn)可并批量交付使用
祝賀川一品牌干式氮吹儀獲河北農(nóng)業(yè)大學(xué)認(rèn)可并批量交付使用近日,川一品牌干式氮吹儀獲河北農(nóng)業(yè)大學(xué)認(rèn)可并批量交付使用。河北農(nóng)業(yè)大學(xué)位于河北保定,是一所省部共建的農(nóng)林類綜合性大學(xué),是我國(guó)較早實(shí)施高等農(nóng)業(yè)教育的院校,學(xué)校有研究中心1個(gè),省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室5個(gè),省級(jí)研究中心10個(gè),在我國(guó)高等院校中實(shí)力排名較前。此次杭州川一有限公司很榮幸能獲得河北農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室老師的認(rèn)可,批量氮吹儀成功交付并投入使用。此系列干式氮
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綦江區(qū)中醫(yī)院選購(gòu)杭州川一臥式全自動(dòng)血液融漿機(jī)
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