百螢課堂之Helixyte? iFluor 750 核酸標記染料實驗方案

時間：2024-01-30作者：西安百螢生物科技有限公司瀏覽：54

Helixyte? iFluor 750 核酸標記染料是我們 Helixyte 核酸標記和綴合技術(shù)的關(guān)鍵成員之一。由于核酸分子中缺乏反應性部分，標簽/半抗原與核酸的標記/綴合一直非常具有挑戰(zhàn)性。胸腺嘧啶和鳥苷經(jīng)常被探索用于核酸綴合，例如光交聯(lián)（通過補骨脂素與胸腺嘧啶）或鳥苷的化/尤氏標記。然而，這些現(xiàn)有的綴合要么繁瑣，要么需要嚴格的條件且產(chǎn)量低，因此不適合常規(guī)實驗室使用。在類似條件下，我們的 Helixyte 核酸標記和綴合技術(shù)易于使用，產(chǎn)量高。 Helixyte? iFluor 750 核酸標記染料提供了一種特的方法，通過簡單的混合步驟將 iFluor 750 熒光團附著到核酸上。標記試劑很容易與鳥呤的N7反應形成穩(wěn)定的共價鍵。貼標過程簡單、快速、產(chǎn)量高。標記的核酸與未反應的染料的分離可以通過簡單的乙醇沉淀、旋轉(zhuǎn)柱或透析來完成。由此產(chǎn)生的標記 DNA/RNA 探針具有明亮的藍色熒光，可以使用 AMCA/Alexa Fluor 750 濾光片組輕松檢測到。它們可用于斑點、Northern 和 Southern 印跡、RNA 和 DNA 原位雜交、多色熒光原位雜交 (mFISH)、比較基因組雜交 (CGH) 或微陣列分析等。




實驗方案

樣品分析方案

概述

將 DNA 與 Helixyte? iFluor 750 核酸標記染料儲備溶液混合

37°C 孵育 1 小時

根據(jù)下游應用的需要進行純化。

 

溶液配制

除非另有說明，所有未使用的儲備溶液應分成一次性等份，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環(huán)

打開小瓶之前，請在室溫下解凍 Helixyte? iFluor 核酸標記染料。短暫離心以收集干燥的沉淀

制備 Helixyte? iFluor 核酸染料儲備溶液

1.將 110 μL DMSO 添加到 Helixyte? iFluor 750 核酸標記染料小瓶中，制備 10 mM 儲備溶液。

注意：建議將任何未使用的儲備溶液分成一次性等份。將等分試樣儲存在 ≤-20 ℃ 下并避光。避免反復凍融循環(huán)。

 

操作步驟

1.根據(jù)下表1中的信息準備標記反應。

表 1. 標準核酸標記反應。

組分	添加到反應中的體積	終濃度
DNA (1 mg/mL)	2 to 5 μL	2 to 5 μg
Helixyte? iFluor  750 核酸標記染料儲備液	0.5 μL	50 μM
TE 緩沖液（pH 8 至 8.5）	添加足夠的緩沖液以將體積調(diào)整至 100 μL

注意：此 DNA:染料比例可產(chǎn)生適合大多數(shù)應用的標記效率。可根據(jù)應用要求調(diào)整 Helixyte? iFluor 750 核酸標記染料的量或反應孵育時間，以修改標記密度。優(yōu)化 DNA 與染料的比例以獲得高的標記率

2.避光、37℃孵育反應1小時。

注意：孵育 30 分鐘后，短暫離心反應，以盡量減少蒸發(fā)的影響并保持反應組分適當?shù)臐舛取?/span>

注意：或者，反應可以在室溫下孵育 2 小時。為了獲得的標記條件，我們建議在 37℃ 下孵育。

3.孵育后，可以純化標記混合物以去除任何游離的標記染料。有關(guān)說明，請參閱下面的“用酒精沉淀純化標簽混合物”部分

 

用酒精沉淀純化標簽混合物

1.將 0.1 體積 (10 uL) 5M 氯化鈉和 2 - 2.5 體積冰冷的 ** 乙醇 (250 uL) 添加到反應中。充分混合并在 ≤ -20°C 下放置至少 30 分鐘。

2.在冷凍微量離心機中全速 (>14,000 x g) 離心 15-30 分鐘，沉淀標記的核酸。沉淀后，用微量移液器小心地除去乙醇。不要打擾顆粒。

注意：少量核酸可能難以看到。在微量離心機中標記并定向含有沉淀物的管，以便沉淀將在預定位置形成。

3.用 500 μL 室溫 70% 乙醇清洗沉淀一次。再全速離心 15-30 分鐘。

4.用微量移液器除去所有乙醇痕跡。不要讓樣品干燥過 5 分鐘，因為沉淀可能會變得難以重新懸浮。

5.用約 30 μL 無菌水重懸標記的 DNA。

6.儲存純化的、標記的核酸以供長期保存或置于冰上以便立即使用。

 




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