百螢問(wèn)號(hào)：熒光鬼筆環(huán)肽及其綴合物常見(jiàn)問(wèn)題解答

時(shí)間：2024-03-25作者：西安百螢生物科技有限公司瀏覽：27

鬼筆環(huán)肽是鬼筆毒素家族的主要代表，是一種雙環(huán)七肽，是從有毒的死亡帽蘑菇傘形毒蕈中分離出來(lái)的。它對(duì)F-肌動(dòng)蛋白亞基之間的凹槽具有很高的親和力。一旦與F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合，鬼筆環(huán)肽就會(huì)使單體和長(zhǎng)絲的平衡向長(zhǎng)絲位置移動(dòng)，并抑制ATP水解。相互作用通過(guò)防止亞基解離來(lái)穩(wěn)定肌動(dòng)蛋白絲，并通過(guò)降低臨界濃度促進(jìn)肌動(dòng)蛋白聚合。結(jié)果，這些特性使得鬼筆環(huán)肽衍生物成為可視化F-肌動(dòng)蛋白和細(xì)胞骨架網(wǎng)絡(luò)的有用染色劑。本周百螢主要想帶大家了解一下關(guān)于鬼筆環(huán)肽、肌動(dòng)蛋白以及染色過(guò)程中經(jīng)常遇到的問(wèn)題。

1.我可以用固定細(xì)胞，然后用熒光鬼筆環(huán)肽染色嗎？

可以使用固定細(xì)胞。請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件選擇固定方法。用甲醛、多聚甲醛或固定細(xì)胞后，用鬼筆環(huán)肽綴合物（例如鬼筆環(huán)肽-iFluor 488）染色效果較佳。

2.在用鬼筆環(huán)肽染料綴合物對(duì)肌動(dòng)蛋白染色之前，應(yīng)如何固定樣品？

避免使用含的固定劑，因?yàn)樗鼤?huì)在固定過(guò)程中會(huì)破壞肌動(dòng)蛋白。優(yōu)選的固定劑是不含的甲醛。

3.在用鬼筆環(huán)肽-iFluor 綴合物對(duì)F-肌動(dòng)蛋白染色之前，我需要對(duì)石蠟包埋的組織切片進(jìn)行脫石蠟處理嗎？您可以提供脫石蠟方案嗎？

是的，使用任何熒光鬼筆環(huán)肽綴合物對(duì)F-肌動(dòng)蛋白染色，都將石蠟包埋的組織切片去石蠟（去除石蠟）。

去除組織切片的石蠟： 

將切片加熱到57°C持續(xù)5分鐘。

將切片浸入2次中，每次5分鐘。

將切片分別浸入100％，95％和70％的乙醇中，每次5分鐘。

用1X PBS洗滌2次，每次5分鐘。

進(jìn)行F-肌動(dòng)蛋白標(biāo)記。

4.甲醛和多聚甲醛在細(xì)胞固定方面有什么區(qū)別？

多聚甲醛（PFA） 是甲醛的聚合物。多聚甲醛本身不是固定劑，需要溶解成甲醛。可以通過(guò)加熱或在堿性條件下溶解得到甲醛。

福爾馬林 是飽和（37％）的名稱。但是請(qǐng)注意，某些商業(yè)中含有以防止聚合（轉(zhuǎn)化為多聚甲醛）。由于100％福爾馬林含有高達(dá)15％的作為穩(wěn)定劑，因此對(duì)細(xì)胞固定有很大影響。

是一種滲透劑。它可以干擾膜結(jié)合蛋白的染色，并且可以大地影響細(xì)胞骨架蛋白的染色。例如，當(dāng)染色細(xì)胞F-肌動(dòng)蛋白時(shí)，使用不含的甲醛固定劑。這是因?yàn)榭梢栽诠潭ㄟ^(guò)程中破壞F-肌動(dòng)蛋白并阻止鬼筆環(huán)肽綴合物的結(jié)合。




5.鬼筆環(huán)肽對(duì)細(xì)胞滲透嗎？

鬼筆環(huán)肽不是細(xì)胞可滲透的，因此不能在活細(xì)胞上使用。熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽，例如Phalloidin-iFluor 488綴合物，只能在甲醛固定和透化的組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)和無(wú)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中用于對(duì)F-肌動(dòng)蛋白染色。




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• 詞條

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