百螢 Annexin V, FITC標(biāo)記實(shí)驗(yàn)過(guò)程

時(shí)間：2024-07-04作者：西安百螢生物科技有限公司瀏覽：31

一、百螢Annexin V, FITC標(biāo)記參數(shù)：

Ex(nm)	491
Em(nm)	516
分 子 量	~36000
存儲(chǔ)條件	在-15℃以下保存，避免光照
溶  劑	Water


       

 

二、百螢 Annexin V, FITC標(biāo)記原理及作用

Annexin V, FITC標(biāo)記是一種模聯(lián)蛋白膜聯(lián)蛋白，膜聯(lián)蛋白是在鈣存在下與磷脂膜結(jié)合的蛋白質(zhì)家族。膜聯(lián)蛋白V是研究細(xì)胞凋亡的有用工具。它被用作探針以檢測(cè)在細(xì)胞表面上表達(dá)磷脂酰絲酸的細(xì)胞，這是細(xì)胞凋亡中發(fā)現(xiàn)的特征以及其他形式的細(xì)胞死亡。有多種參數(shù)可用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力。膜聯(lián)蛋白V-染料結(jié)合物廣泛用于通過(guò)測(cè)量磷脂酰絲酸（PS）的易位來(lái)監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡。在細(xì)胞凋亡中，PS被轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜的外部小葉。磷脂酰絲酸在細(xì)胞表面上的出現(xiàn)是細(xì)胞凋亡的初始/中間階段的通用指示，并且可以在觀察到形態(tài)變化之前檢測(cè)到。該熒光FITC-膜聯(lián)蛋白V綴合物廣泛用于通過(guò)流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡。

 

三、百螢 Annexin V, FITC標(biāo)記實(shí)驗(yàn)方案

操作步驟

1.用膜聯(lián)蛋白V綴合物制備和孵育細(xì)胞：

1.1     制備膜聯(lián)蛋白V綴合測(cè)定緩沖液：10mM HEPES，140mM l和2.5mM CaCl2，pH 7.4。

1.2     用測(cè)試化合物處理細(xì)胞一段時(shí)間（用星形孢菌素處理的Jurkat細(xì)胞4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

1.3     離心細(xì)胞，得到1-5×10 5個(gè)細(xì)胞/管。

1.4     將細(xì)胞重懸于200μLAnnexin V綴合測(cè)定緩沖液中（來(lái)自步驟1.1）。

1.5     在細(xì)胞中加入2μL膜聯(lián)蛋白V綴合物。

可選：在細(xì)胞內(nèi)加入死細(xì)胞染色劑如碘化丙錠，用于死細(xì)胞。

1.6     在室溫下進(jìn)行30至60分鐘，避光。

1.7     在用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡分析細(xì)胞之前，加入300μLAnnexin V綴合測(cè)定緩沖液（來(lái)自步驟1.1）以增加體積（參見(jiàn)下面的步驟1.8）。

1.8     使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測(cè)熒光強(qiáng)度（參見(jiàn)下面的步驟2或3）。

 

2.使用流式細(xì)胞儀分析：

通過(guò)使用具有適當(dāng)濾波器的流式細(xì)胞儀來(lái)量化膜聯(lián)蛋白V綴合物。

注意：對(duì)貼壁細(xì)胞的膜聯(lián)蛋白V結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)分析未經(jīng)過(guò)常規(guī)測(cè)試，因?yàn)樵诩?xì)胞分離過(guò)程中可能會(huì)發(fā)生特定膜損傷。

 

3.使用熒光顯微鏡分析：

3.1    吸取步驟1.6中的細(xì)胞懸液，用膜聯(lián)蛋白V結(jié)合測(cè)定緩沖液（步驟1.1）沖洗1-2次，然后用膜聯(lián)蛋白V結(jié)合測(cè)定緩沖液（步驟1.1）重懸細(xì)胞。 將細(xì)胞添加到載玻片上并蓋上蓋玻片。

注意：對(duì)于貼壁細(xì)胞，建議直接在蓋玻片上培養(yǎng)細(xì)胞。 與膜聯(lián)蛋白V結(jié)合物孵育后（步驟1.6），用膜聯(lián)蛋白V結(jié)合測(cè)定緩沖液（來(lái)自步驟1.1）沖洗1-2次，然后將膜聯(lián)蛋白V結(jié)合測(cè)定緩沖液（來(lái)自步驟1.1）加回到蓋玻片上。 將蓋玻片倒在載玻片上并使細(xì)胞可視化。 與膜聯(lián)蛋白V綴合物一起孵育后，也可以將細(xì)胞固定在2％甲醛中，并在顯微鏡下觀察。

3.2     在熒光顯微鏡下用適當(dāng)?shù)臑V光片分析膜聯(lián)蛋白V綴合物的凋亡細(xì)胞。


西安百螢生物科技有限公司專注于試劑,試劑盒,實(shí)驗(yàn)室耗材等

• 詞條

  詞條說(shuō)明

• 百螢 鏈霉親和素偶聯(lián)物AF594標(biāo)記光普特性

  1.百螢 鏈霉親和素偶聯(lián)物AF594標(biāo)記概述鏈霉親和素的結(jié)合物通常與生物素結(jié)合物一起使用，用于在蛋白質(zhì)印跡，流式細(xì)胞儀，成像和顯微鏡以及微孔板檢測(cè)中特異性檢測(cè)多種蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)基序，核酸和其他生物分子。AF594-鏈霉親和素綴合物等同于594鏈霉親和素，其包含共價(jià)附接到594的生物素結(jié)合鏈霉親和素。2.百螢 鏈霉親和素偶聯(lián)物AF594標(biāo)記光普特性吸收能力(nm)?592校正系數(shù)(260n

• 百螢課堂---關(guān)于Annexin V的那些疑惑

  1.百螢---Annexin V簡(jiǎn)介Annexin V作為一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲酸有高度親和力，它通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V是檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)。?2.百螢---Annexin V適用儀器Annexin V凋亡檢測(cè)試劑盒適用儀器：流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡。?3.百螢---Annexin V常見(jiàn)問(wèn)題以及解答Q: &nb

• 百螢 用于熒光成像的工具----A** 488 NHS酯

  1.百螢 ?A** 488 NHS酯概述?A** 488 NHS酯是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的熒光染料。A** 488是一種基于羅丹明的熒光標(biāo)記。與其他A**染料不同，它具有優(yōu)異的水溶性。它具有良好的光譜特性，可用于熒光成像應(yīng)用，包括強(qiáng)吸收，高熒光產(chǎn)率和高光穩(wěn)定性。A** 488非常適用于單分子檢測(cè)應(yīng)用和高分辨率顯微鏡，如PALM，dSTORM，STED等。該

• 百螢問(wèn)答之鈣離子熒光探針腔腸素的工作原理是怎樣的

  鈣測(cè)量對(duì)于許多生物學(xué)研究至關(guān)重要，鈣離子熒光探針腔腸素是進(jìn)行鈣測(cè)量的有效工具，跟著小螢一起看看它是怎么工作的吧。?1.百螢 鈣離子熒光探針腔腸素工作原理水母發(fā)光蛋白復(fù)合物包含22kD的載水母發(fā)光蛋白，分子氧和發(fā)光體腔腸素。當(dāng)三個(gè)Ca2 +離子與該配合物結(jié)合時(shí)，腔腸素被氧化為腔腸酰胺，并伴有二氧化碳和藍(lán)光的釋放。水母發(fā)光蛋白的生物發(fā)光對(duì)Ca2 +濃度的大約三次方依賴性，可以在?0.1 μM