宜都市**肥總養(yǎng)分 蛔蟲卵死亡率

時間：2022-01-22作者：武漢廣分認(rèn)證有限公司瀏覽：174

肥料中蛔蟲卵死亡率的測定 GB/T 19524.2—2004

1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了肥料中蛔蟲卵死亡率的測定方法。

2 測定方法原理

將堿性溶液與肥料樣品充分混合，分離蛔蟲卵，然后用密度較蛔蟲卵密度大的溶液為漂浮液，使蛔蟲卵漂浮在溶液的表面，從而收集。

3 試驗方法

3.1 儀器設(shè)備：騰宇儀**肥配套設(shè)備

3.2 試劑：騰宇儀**試劑

3.3 程序：02

3.3.1 蛔蟲卵分離

稱取5.0～10.0g樣品（顆粒較大的樣品應(yīng)**行研磨），放于容量為50mL離心管中，注入NaOH溶液25～30mL，另加玻璃珠約10粒，用橡皮塞塞緊管口，放置在振蕩器上，靜置30min后，以200～3001rmin頻率振蕩10～15min。振蕩完畢，取下離心管上的橡皮塞，用玻璃棒將離心管中的樣品充分?jǐn)噭?，再次用橡皮塞塞緊管口，靜置15～30min 后，振蕩10～15min。

3.3.2 離心沉淀

從振蕩器上取下離心管，拔掉橡皮塞，用滴管吸取蒸餾水，將附著于橡皮塞上和管口內(nèi)壁的樣品沖入管中，以2000～2500r/min速度離心3～5min后，棄去上清液。然后加適量蒸餾水，并用玻璃棒將沉淀物攪起，按上述方法重復(fù)洗滌三次。

3.3.3 離心漂浮

往離心管中加入少量飽和NaNO3溶液，用玻璃棒將沉淀物攪成糊狀后，再徐徐添加飽和NaNO3溶液，隨加隨攪，直加到離管口約1cm為止，用飽和NaNO3溶液沖洗玻璃棒，洗液并入離心管中，以2000～2500r/min速度離心3～5min。

用金屬絲圈不斷將離心管表層液膜移于盛有半杯蒸餾水的燒杯中，約30次后，適當(dāng)增加一些飽和NaNO3溶液于離心管中，再次攪拌、離心及移置液膜，如此反復(fù)操作３～４次，直到液膜涂片觀察不到蛔蟲卵為止。

3.3.4 抽濾鏡檢

將燒杯中混合懸液，通過覆以微孔火棉膠濾膜的高爾特曼氏漏斗抽濾。若混合懸液的渾濁度大，可更換濾膜。

抽濾完畢，用彎頭鑷子將濾膜從漏斗的濾臺上小心取下，置于載玻片上，滴加二、三滴甘油溶液，于低倍顯微鏡下對整張濾膜進行觀察和蛔蟲卵計數(shù)。當(dāng)觀察有蛔蟲卵時，將含有蛔蟲卵的濾膜進行培養(yǎng)。

3.3.5 培養(yǎng)

在培養(yǎng)皿的底部平鋪一層厚約1cm的脫脂棉，脫脂棉上鋪一張直徑與培養(yǎng)皿相適的普通濾紙。為防止霉菌和原生動物的繁殖，可加入甲醛溶液或甲醛生理鹽水，以浸透濾紙和脫脂棉為宜。

將含蛔蟲卵的濾膜平鋪在濾紙上，培養(yǎng)皿加蓋后置于中，在28℃～30℃條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中經(jīng)常滴加蒸餾水或甲醛溶液，使濾膜保持潮濕狀態(tài)。

3.3.6 鏡檢

培養(yǎng)10～15d，自培養(yǎng)皿中取出濾膜置于載玻片上，滴加甘油溶液，使其透明后，在低倍鏡下查找蛔蟲卵，然后在高倍鏡下根據(jù)形態(tài)，鑒定卵的死活，并加以計數(shù)。鏡檢時若感覺視野的亮度和膜的透明度不夠，可在載玻片上滴一滴蒸餾水，用蓋玻片從濾膜上刮下少許含卵濾渣，與水混合均勻，蓋上蓋玻片進行鏡檢。

3.3.7 判定

凡含有幼蟲的，都認(rèn)為是活卵，未孵化或單細(xì)胞的都判為死卵。

3.3.8 結(jié)果計算

K=100(N1-N2)/ N1

式中：

K—蛔蟲卵死亡率（%）

N1—鏡檢總卵數(shù)

N2—培養(yǎng)后鏡檢活卵數(shù)


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