蒸汽滅菌中較常見(jiàn)的十種錯(cuò)誤及對(duì)策

時(shí)間：2019-02-21作者：山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司瀏覽：93

常見(jiàn)蒸汽滅菌柜的大多數(shù)程序和操作錯(cuò)誤都與蒸汽滅菌的基本原理有關(guān)。

1. 滅菌柜中放入關(guān)閉閥門(mén)的容器、旋緊瓶蓋或緊扣鋁蓋的空玻璃瓶。
由于蒸汽不能直接接觸到內(nèi)表面，不能進(jìn)行滅菌。這一問(wèn)題可通過(guò)確保滅菌柜中的物品有蒸汽進(jìn)入和空氣排出的通道來(lái)解決。如果不確定物品的配置、設(shè)置、包裝或方位是否允許充分的蒸汽穿透，那么可以通過(guò)在物品內(nèi)部放置熱電偶、化學(xué)和/或生物指示劑來(lái)確定。

2. 袋裝和/或嚴(yán)密包裹的物品緊實(shí)地裝載在腔室內(nèi)。
由于預(yù)調(diào)節(jié)階段后空氣可能仍然滯留在物品中，阻礙了滅菌。物品不應(yīng)過(guò)度包裹，且應(yīng)在物品間留有足夠的空間。預(yù)調(diào)節(jié)真空和壓力脈動(dòng)必須正確地設(shè)定，以完全排除裝載內(nèi)的空氣。通常，應(yīng)該程序設(shè)定達(dá)到6.9 kPa (**壓力)真空且四次(及以上)預(yù)真空脈動(dòng)，以確保較差裝載情況下空氣排除充分。有些非常密集的裝載在預(yù)調(diào)節(jié)真空峰值時(shí)可能需要一段較短（2-5 min）的保持時(shí)間，從而排除滯留的空氣。預(yù)調(diào)節(jié)真空脈動(dòng)應(yīng)設(shè)定為21~34.5 kPa (表壓)。預(yù)調(diào)節(jié)壓力脈動(dòng)可能造成暴露階段前幾分鐘時(shí)的過(guò)熱和溫度穩(wěn)定困難。

3. 較重的物品置于貨架**層。
滅菌循環(huán)結(jié)束后，置于中間和低層的物品包裝外表面可以看到水滴和/或污跡。由于物品不是干燥的，不能從滅菌柜中無(wú)菌地取出。冷凝是蒸汽接觸物品冷表面時(shí)的自然結(jié)果。冷凝水會(huì)從貨架上滴下。
物品的放置越密，產(chǎn)生的冷凝水越多。因此，將較重的物品放置于低層。另外，在裝載前考慮在各滅菌裝載貨架上放置純棉布或無(wú)絨毛巾來(lái)吸收冷凝水。這也有助于干燥。由于冷凝水浸入棉布或無(wú)絨毛巾，冷凝水表面積大大增加，與同量冷凝水滴相比干燥階段的氣化速率也大大提高。

4. 裝載過(guò)于密集或物品在裝載中擺放位置不對(duì)。
循環(huán)結(jié)束時(shí)發(fā)現(xiàn)物品變得潮濕。放于會(huì)收集冷凝水的位置的包裹物品不會(huì)被干燥。物品的放置應(yīng)允許冷凝水向下流動(dòng)。物品（包裹、呼吸袋、過(guò)濾器或其它多孔生物濾膜）由于在循環(huán)結(jié)束時(shí)仍是濕的，在從滅菌柜取出時(shí)不能避免裝載的污染。由于在滅菌柜外冷卻，包裹上的水會(huì)浸入到被包裹的物品中。任何環(huán)境中的污染源都可能隨水一起穿過(guò)無(wú)菌屏障。還有許多其它原因可能會(huì)造成裝載潮濕，較常見(jiàn)的是：
a. 程序設(shè)計(jì)干燥真空水平或時(shí)間不夠
b. 袋裝的橡膠或塑料制品（如橡膠塞、塑料管）可能需要額外的干燥（對(duì)于這些物品，推薦采用脈動(dòng)空氣或脈動(dòng)熱空氣干燥工藝）
c. 濕蒸汽
由于沒(méi)有哪個(gè)方案一定能有效*裝載潮濕，很可能通過(guò)試驗(yàn)干燥時(shí)間、重新放置物品、降低裝載密度、改進(jìn)循環(huán)設(shè)置和調(diào)查蒸汽質(zhì)量可以解決這個(gè)問(wèn)題。

5. 紙塑袋平放于滅菌柜貨架上或疊放在一起。
因此，紙塑袋可能會(huì)有水滴在內(nèi)部，不能從滅菌柜中無(wú)菌地取出。通常原因是蒸汽穿透呼吸袋和接觸物品表面時(shí)會(huì)自然形成冷凝水，這些冷凝水在后調(diào)節(jié)干燥階段沒(méi)能除去。紙塑袋應(yīng)留有足夠的空隙，并放置于擱架上（圖1）， 以防止紙塑袋內(nèi)部冷凝水聚集。紙塑袋不應(yīng)平放于滅菌架上。紙塑袋不應(yīng)疊放。記住，物品越多，冷凝水越多。程序應(yīng)設(shè)定足夠的干燥真空水平和時(shí)間，使冷凝水完全氣化。濕蒸汽應(yīng)調(diào)節(jié)為飽和蒸汽。雙層紙塑袋可能需要額外的預(yù)真空脈動(dòng)，在較大真空時(shí)保持一定時(shí)間并增加干燥時(shí)間。雙層紙塑袋絕不應(yīng)以看不到內(nèi)部物品的方式組裝。袋口不應(yīng)折疊起來(lái)。





6. 通氣容器中的液體放置于深托盤(pán)內(nèi)，以收集沸溢的液體（在緩慢排氣循環(huán)）。

托盤(pán)會(huì)容納水也會(huì)滯留空氣。蒸汽不能在托盤(pán)內(nèi)受滯留空氣的阻礙而不能接觸到表面，因此達(dá)不到滅菌效果。解決方法是去除托盤(pán)，調(diào)事滅菌柜的緩慢排氣速率，防止沸溢。淺托盤(pán)，少于25 mm深，可用于少量沸溢不可避免時(shí)的情況。

7. 培養(yǎng)基“加熱過(guò)久”
培養(yǎng)基過(guò)度滅菌會(huì)使糖分焦化，使培養(yǎng)基失效。
培養(yǎng)基滅菌不推薦采用典型的過(guò)度殺滅方法。程序應(yīng)設(shè)計(jì)暴露階段，以恰好達(dá)到所需的SAL。在大于100 ml的容器內(nèi)的培養(yǎng)基推薦采用裝載探頭和F0值暴露控制滅菌。如圖2所示，F(xiàn)0是121.1°C 以外的溫度下計(jì)算等效暴露。隨著液體被加熱，計(jì)算出的F0（從裝載探頭溫度）逐漸累積，直到達(dá)到所選的F0暴露值（分鐘），此時(shí)循環(huán)進(jìn)行至排氣/冷卻階段。例如，從圖上可以看出，在118°C時(shí)同樣數(shù)量微生物的殺死率是在121°C時(shí)的一半。因此，在118°C 時(shí)，需要兩倍的暴露時(shí)間才能殺死同樣數(shù)量的微生物。
計(jì)算F0值的常見(jiàn)公式是：
其中，
L是細(xì)菌孢子致死率
t是暴露時(shí)間，[s]
T是暴露溫度，[°C]
z是常數(shù)，[°C]
常數(shù)z描述熱力致死曲線的斜率。對(duì)于蒸汽滅菌，廣泛認(rèn)同的z值是10°C 。

8. 真空泵使用的冷卻水過(guò)熱。
因此，真空泵可能達(dá)不到6.9 kPa。真空滅菌的**是水環(huán)真空泵。在夏季期間經(jīng)常發(fā)生水溫過(guò)高，這可能會(huì)對(duì)水環(huán)真空泵的效能和極限真空度造成不良影響。在操作期間，泵內(nèi)的水由于機(jī)械摩擦和滅菌腔室的熱量被加熱。如果預(yù)調(diào)節(jié)或后調(diào)節(jié)真空期間泵內(nèi)的水溫達(dá)到39°C ，泵內(nèi)的水在≤ 6.9 kPa真空下會(huì)沸騰，造成氣蝕。
這種情況下，滅菌腔室內(nèi)就達(dá)不到推薦的真空水平6.9 kPa。這種情況常見(jiàn)的“應(yīng)對(duì)措施”就是改變預(yù)真空脈動(dòng)的真空設(shè)定值，降為可達(dá)到的水平。
這可能造成排氣不足，除非增加真空脈動(dòng)次數(shù)，從而造成循環(huán)周期延長(zhǎng)，排氣效率下降。如果真空泵進(jìn)水未經(jīng)冷卻，夏季時(shí)經(jīng)常發(fā)現(xiàn)泵內(nèi)溫度**39°C 。冷凍水是理想選擇，但對(duì)于滅菌柜真空泵來(lái)說(shuō)成本過(guò)高，因?yàn)檎婵毡玫某鏊苯优欧拧Ｍ扑]措施是真空泵配循環(huán)冷卻水系統(tǒng)，采用冷凍水和閉路循環(huán)換熱器。這種配置可節(jié)省大量的水，經(jīng)濟(jì)環(huán)保。此外，真空泵效率不受水溫季節(jié)性波動(dòng)的影響。

9. 有裝載探頭但沒(méi)有使用。
多數(shù)現(xiàn)代滅菌柜配備（可選）了一個(gè)RTD裝載探頭和F0暴露控制，用于液體滅菌的控制，但是許多情況下這一探頭都沒(méi)有被使用。如果配備了裝載探頭，暴露可以依據(jù)液體溫度來(lái)控制，而不是排放管路內(nèi)的溫度。如果沒(méi)有裝載探頭，液體溫度是未知的，只能估算，因此造成滅菌不充分（非無(wú)菌）或過(guò)度（加熱過(guò)久）。裝載探頭應(yīng)置于含水容器內(nèi)，容器內(nèi)盛水體積約為待滅菌液體的較大體積。裝載探頭控制/F0必須在滅菌柜控制設(shè)置中選擇。

10. 卸壓/抽真空速率控制可用，但沒(méi)有使用。
多數(shù)現(xiàn)代滅菌柜具備（可選）抽真空和卸壓速率的控制功能，但許多情況下該速率控制并沒(méi)有被使用。如果沒(méi)有采用卸壓速率控制，在預(yù)調(diào)節(jié)卸壓階段，蒸汽將以較大速率進(jìn)入腔室，從而造成過(guò)熱的問(wèn)題和EN285符合性問(wèn)題。減緩卸壓速率使卸壓過(guò)程中的過(guò)熱有時(shí)間分散。
如果沒(méi)有采用抽真空速率控制，腔室將以真空泵的較大速率形成真空。這造成的常見(jiàn)問(wèn)題是爆袋。在預(yù)調(diào)節(jié)和后調(diào)節(jié)抽真空階段，減緩抽真空速率使呼吸袋內(nèi)部壓力有時(shí)間平衡，并防止爆袋。

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