食品中蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法

時(shí)間：2020-09-05作者：中科檢測(cè)技術(shù)服務(wù)（廣州）股份有限公司瀏覽：407

食品中蛋白質(zhì)是人類較重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之一，準(zhǔn)確測(cè)定蛋白質(zhì)含量是食品檢驗(yàn)工作的一項(xiàng)重要內(nèi)容。食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義，食物中準(zhǔn)確的蛋白質(zhì)含量為合理配膳提供數(shù)據(jù)，掌握食品的營(yíng)養(yǎng)**和品質(zhì)的變化，保證不同人群對(duì)蛋白質(zhì)的需要。目前，我國(guó)的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中有3個(gè)可以測(cè)定食品中蛋白質(zhì)的理化方法,分別為GB 5009.5-2016 《食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》中的**法凱氏定氮法、*二法分光光度法、*三法燃燒法。此外，還有雙縮脲法(Biuret 法)、Folin-酚試劑法(Lowry 法)等檢驗(yàn)方法，可以對(duì)食品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行定性和定量的測(cè)定。接下來，我們就來看看食品中蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法有哪些。

 

1、凱氏定氮法

測(cè)定原理：在催化加熱條件下，食品中的蛋白質(zhì)被分解，分解后的產(chǎn)物氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。堿化蒸餾使氨游離,用硼酸吸收游離氨后以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定，根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)的含量。凱氏定氮法是測(cè)定化合物或混合物中總氮量的一種方法。在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品將有機(jī)氨都轉(zhuǎn)變成無機(jī)銨鹽，然后在堿性條件下將銨鹽轉(zhuǎn)化為氨，隨水蒸氣餾出并被過量的酸液吸收，再以標(biāo)準(zhǔn)堿滴定,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量計(jì)算出樣品中的氮量。

優(yōu)點(diǎn):

①測(cè)定結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，在國(guó)內(nèi)各大檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)中比較普及;

②靈敏度低、干擾少，適用于0.2~ 1.0mg氮，誤差為土2%。

缺點(diǎn)：

①一般測(cè)定時(shí)間為8~ 10h,費(fèi)時(shí)且試劑消耗量大;

②有局限性,即難以把有機(jī)物定量轉(zhuǎn)變成氨，特別是含有硝酸鹽的樣品會(huì)影響總氨的結(jié)果，影響測(cè)定準(zhǔn)確性。

 

2、分光光度法

測(cè)定原理：在催化加熱條件下，食品中的蛋白質(zhì)被分解，產(chǎn)生的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨，其在pH4.8的乙酸鈉-乙酸緩沖溶液中與乙酰丙酮和甲醛反應(yīng)生成黃色的3,5-二乙酰-2,6-二甲基-1,4-二氫化吡啶化合物。在波長(zhǎng)400nm下測(cè)定化合物吸光度值，將其與標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)行比較定量，結(jié)果乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)含量。

優(yōu)點(diǎn):

①簡(jiǎn)化了操作,省去了蒸餾、滴定的步驟，使用常見的分光光度計(jì),便于廣泛推廣應(yīng)用，為蛋白質(zhì)的測(cè)定提供了凱氏定氮法的簡(jiǎn)化方法；

②消化時(shí)間相對(duì)較短,所用消化設(shè)備簡(jiǎn)便,常用，易于推廣測(cè)量靈敏度高、快速，方便低濃度蛋自質(zhì)含量可檢測(cè)。本法采用硫酸銨作為銨離子標(biāo)準(zhǔn)溶液，避免引入其他雜質(zhì)。

缺點(diǎn):

易受溶液中雜質(zhì)的影響、干擾因素較多，存在潛在的偏差，標(biāo)準(zhǔn)曲線不易繪制精確。

 

3、燃燒法

測(cè)定原理：試樣在900~1200℃高溫下燃燒，燃燒過程中產(chǎn)生混合氣體，氮氧化物被全部還原成氮?dú)?，其中的碳、硫等干擾氣體和鹽類被吸收管吸收，形成的氮?dú)鈿饬魍ㄟ^熱導(dǎo)檢測(cè)儀(TCD)進(jìn)行檢測(cè)。

優(yōu)點(diǎn):

①操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)*檢測(cè)樣品*消化，自動(dòng)進(jìn)樣，5~8 min即可完成一個(gè)樣品的檢測(cè);②檢測(cè)數(shù)據(jù)誤差較低，由于凱氏定氮法與燃燒法在實(shí)驗(yàn)原理上的不同，在實(shí)際檢測(cè)中，同個(gè)樣品用兩種方法檢測(cè)有時(shí)會(huì)出現(xiàn)不同的結(jié)果，而且實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)燃燒法檢測(cè)出來的數(shù)據(jù)略**凱氏定氮法;燃燒法能夠?qū)悠分械牡厝繖z測(cè)出來,以動(dòng)物性蛋白樣品為例，凱氏法只能測(cè)定出其中的有機(jī)氮，而燃燒法可以測(cè)出有機(jī)氮和無機(jī)氮;③檢測(cè)過程少污染，蛋白質(zhì)燃燒法檢測(cè)過程中不產(chǎn)生有毒有害物質(zhì)，清潔,環(huán)保。

①對(duì)于不均勻的復(fù)雜樣品分析難度較大，樣品需要確保研磨均勻而且要較細(xì)顆粒，否則易出現(xiàn)燃燒不完全的情況，進(jìn)而影響后續(xù)的檢測(cè)結(jié)果;

②儀器耗材消耗快,儀器昂貴，檢測(cè)成本高，在凈化過程中，燃燒過程中產(chǎn)生混合氣體被適當(dāng)?shù)奈談┏ァ＿@些吸收劑在大批量的樣品檢測(cè)中有較大的消耗量，需經(jīng)常更換。而且燃燒法中用到的儀器杜馬斯定氮儀本身價(jià)格較為昂貴，因此限制了這一方法的推廣和應(yīng)用。

 

4、雙縮脲法(Biuret法)

測(cè)定原理：雙縮脲法是一個(gè)可以用于鑒定蛋白質(zhì)的分析方法。雙縮脲試劑是堿性的含銅試液，由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制，呈藍(lán)色。當(dāng)?shù)孜镏泻须逆I(多肽)時(shí)，試液中的銅與多肽配位，生成的配合物呈紫色間。在紫外可見光譜中的波長(zhǎng)為540 nm，可通過比色法分析濃度。檢測(cè)反應(yīng)的靈敏度為5 ~ 160 mg/mL。

優(yōu)點(diǎn):

較快速，不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近，干擾物質(zhì)較少。

缺點(diǎn):

靈敏度差，因此雙縮脲法常用于快速，但并不需要十分精確的蛋白質(zhì)測(cè)定。

 

中科檢測(cè)具備豐富檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)，能依據(jù)國(guó)家相關(guān)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行蛋白質(zhì)檢測(cè)，出具可靠檢測(cè)結(jié)果。如果有相關(guān)業(yè)務(wù)需求，歡迎聯(lián)系。


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