百螢問號之鈣離子熒光探針Fluo4AM適用儀器有哪些

時(shí)間：2024-03-14作者：西安百螢生物科技有限公司瀏覽：46

鈣離子熒光探針Fluo-4 AM是美國AAT Bioquest的鈣離子熒光探針，鈣通量測定是用于篩選G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）的藥物發(fā)現(xiàn)中的優(yōu)選方法。 我們的Fluo-4?和Rhod-4 系列鈣檢測試劑是亮的和紅色鈣指示劑，而我們的Cal-520 和Cal-590 具有高的細(xì)胞內(nèi)鈣檢測信號/背景比。AAT Bioquest以高質(zhì)量提供其他鈣指標(biāo)，如Fluo-4，F(xiàn)luo-3，F(xiàn)ura-2，Indo-1，Rhod-5N和Rhod-2 AM。




一.百螢 鈣離子熒光探針Fluo4AM參數(shù)

 

Ex(nm)	495
Em(nm)	528
分子量	1096.95
溶  劑	DMSO
存儲條件	在-15℃以下保存，避光防潮




 

二.百螢 鈣離子熒光探針Fluo4AM適用儀器

熒光顯微鏡

Ex:	FITC 濾波片組
Em:	FITC 濾波片組
孔板:	黑色透明底板

 

熒光酶標(biāo)儀

Ex:	490nm
Em:	525nm
Cutoff:	515nm
孔板:	黑色透明底板
讀取模式:	底讀模式/可分液處理


  




三、百螢 鈣離子熒光探針Fluo4AM實(shí)驗(yàn)方案

 

實(shí)驗(yàn)方案

儲備溶液配制

在高質(zhì)量無水DMSO制備2至5 mM 的Fluo-4 AM中儲備溶液。

 

工作溶液配制

Fluo-4 AM工作溶液
1.在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，將Fluo-4AM溶解在DMSO中，或?qū)⒅甘緞﹥淙芤旱牡确衷嚇咏鈨鲋潦覝亍?/span>

2.在含有0.04%Pluronic?F-127的緩沖液（例如Hanks和Hepes緩沖液）中制備2至20μM Fluo-4 AM工作溶液。對于大多數(shù)細(xì)胞系，建議使用終濃度為4-5μM的Fluo-4 AM。細(xì)胞負(fù)載所需指示劑的確切濃度請根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。

注：非離子洗滌劑Pluronic F-127用于提高Fluo-4 的水溶性?？蓮陌傥炠徺I各種Pluronic F-127溶液。
注：如果你的細(xì)胞含有陰離子蛋白，可以將丙磺舒（1-2mM）添加到染料工作溶液中（終井內(nèi)濃度為0.5-1mM），以減少酯化指示劑的泄漏。多種形式的丙磺舒產(chǎn)品，包括水溶性、鈉鹽和穩(wěn)定溶液，可從百螢購買。

 

操作步驟

以下是我們的將AM酯加載到活細(xì)胞中的方案。本方案僅提供指南，實(shí)際應(yīng)根據(jù)您的具體需求進(jìn)行修改。

1.在生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞過夜。
2.二天，將1X Fluo-4 AM工作溶液添加到孔板中。
注意：如果你的化合物干擾，在染色前用新鮮的HHBS緩沖液代替生長培養(yǎng)基。
3.將加入染料的孔板在37°C的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30至60分鐘。
注：將染料培養(yǎng)2小時(shí)以上可以提高某些細(xì)胞系的信號強(qiáng)度。
4.用HHBS或您選擇的緩沖液（含有陰離子蛋白抑制劑，如1mM丙磺舒）代替染料工作溶液，以去除任何多余的探針。
5.根據(jù)需要添加刺激物，并同時(shí)使用配備有FITC濾波片組的熒光顯微鏡或包含可編程液體處理系統(tǒng)（如FDSS、FLIPR或FlexStation）的熒光酶標(biāo)儀在490/525nm，Cutoff=515nm處檢測熒光強(qiáng)度。




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