內(nèi)標(biāo)物選擇的原則

時(shí)間：2020-01-15作者：東莞市迪卡實(shí)驗(yàn)科技有限公司瀏覽：684

內(nèi)標(biāo)法是結(jié)合了峰面積歸一法和外標(biāo)法的優(yōu)點(diǎn)的一種方法，它在加入內(nèi)標(biāo)物后，按峰面積歸一法的分析方法進(jìn)行分析，這就避免了由于進(jìn)樣的一致性及樣品歧視效應(yīng)導(dǎo)致的偶然誤差。因而，它的分析精密度也是比較高的，是一種比較理想的定量分析方法。它的弱點(diǎn)是前處理比較復(fù)雜，所花費(fèi)的時(shí)間也比較長，同時(shí)必須要有合適的標(biāo)樣及內(nèi)標(biāo)物才能進(jìn)行內(nèi)標(biāo)法定量分析。



內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)缺點(diǎn)

內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)點(diǎn)：

對(duì)進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求，測定的結(jié)果也較為準(zhǔn)確，由于通過測量內(nèi)標(biāo)物及被測組分的峰面積的相對(duì)值來進(jìn)行計(jì)算的，因而在一定程度上消除了進(jìn)樣量、儀器不穩(wěn)定等變化所引起的誤差，只對(duì)欲分析的組分峰做校正。

內(nèi)標(biāo)法的缺點(diǎn)

是必須加一個(gè)組分進(jìn)到樣品，易增加面積測量誤差。操作程序較為麻煩，每次分析時(shí)內(nèi)標(biāo)物和試樣都要準(zhǔn)確稱量，有時(shí)尋找合適的內(nèi)標(biāo)物也有困難。

內(nèi)標(biāo)物的選擇原則

采用內(nèi)標(biāo)法定量時(shí)，內(nèi)標(biāo)物的選擇是一項(xiàng)十分重要的工作。理想地說，內(nèi)標(biāo)物應(yīng)當(dāng)是一個(gè)能得到純樣的已知化合物，這樣它能以準(zhǔn)確、已知的量加到樣品中去，它應(yīng)當(dāng)和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學(xué)性質(zhì)(如化學(xué)結(jié)構(gòu)、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應(yīng)特征，較好是被分析物質(zhì)的一個(gè)同系物。當(dāng)然，在色譜分析條件下，內(nèi)標(biāo)物必須能與樣品中各組分充分分離。需要指出的是，在少數(shù)情況下，分析人員可能比較關(guān)心化合物在一個(gè)復(fù)雜過程中所得到的回收率，此時(shí)，他可以使用一種在這種過程中很*被完全回收的化合物作內(nèi)標(biāo)，來測定感興趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所說的選擇原則。

對(duì)于內(nèi)標(biāo)法定量分析來說，內(nèi)標(biāo)物的選擇是及其重要的。它必須滿足如下的條件：

1.內(nèi)標(biāo)物與被分析物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)要相似(如：沸點(diǎn)、極性、化學(xué)結(jié)構(gòu)等);

2.內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是該試樣中不存在的純物質(zhì);

3.它必須完全溶于被測樣品(或溶劑)中，且不與被測樣品起化學(xué)反應(yīng);并與試樣中各組分的色譜峰能完全分離;

4.能加入內(nèi)標(biāo)物的量應(yīng)接近于被測組分;

5.色譜峰的位置應(yīng)與被測組分的色譜峰的位置相近，或在幾個(gè)被測組分色譜峰中間。且又不共溢出，目的是為了避免儀器的不穩(wěn)定性所造成的靈敏度的差異;

6.選擇合適的內(nèi)標(biāo)物加入量，使得內(nèi)標(biāo)物和被分析物質(zhì)二者峰面積的匹配性大于75%，以免由于它們處在不同響應(yīng)值區(qū)域而導(dǎo)致的靈敏度偏差。

需要指出的是，在少數(shù)情況下，分析人員可能比較關(guān)心化臺(tái)物在一個(gè)復(fù)雜過程中所得到的回收率，此時(shí)，可以使用在這過程中很*被完全回收的化臺(tái)物作內(nèi)標(biāo)，來測定感興趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所說的選擇原則。

在使用內(nèi)標(biāo)法定量時(shí)，有哪些因素會(huì)影響內(nèi)標(biāo)和被測組分的峰高或峰面積的比值?

影響內(nèi)標(biāo)和被測組分峰高或峰面積比值的因素主要有化學(xué)方面的、色譜方面的和儀器方面的三類。

由化學(xué)方面的原因產(chǎn)生的面積比的變化常常在分析重復(fù)樣品時(shí)出現(xiàn)。

化學(xué)方面的因素包括：

1、內(nèi)標(biāo)物在樣品里混合不好;

2、內(nèi)標(biāo)物和樣品組分之間發(fā)生反應(yīng)，

3、內(nèi)標(biāo)物純度可變等。

內(nèi)標(biāo)法操作：

將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入標(biāo)準(zhǔn)樣品，制成混合標(biāo)樣，并配制一系列的已知濃度的工作標(biāo)樣?；旌蠘?biāo)樣中標(biāo)樣與內(nèi)標(biāo)樣的摩爾比不變。

注入色譜柱，以(標(biāo)樣峰面積/內(nèi)標(biāo)樣峰面積)為響應(yīng)值。

根據(jù)響應(yīng)值與工作標(biāo)樣濃度之間存在的線性關(guān)系，即W=f×A，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

將已知量的內(nèi)標(biāo)樣加入未知樣品，注入色譜柱，得到欲測組分的響應(yīng)值。

根據(jù)已知的系數(shù)f，即可求出欲測組分的濃度。

內(nèi)標(biāo)法的特點(diǎn)：

操作過程中樣品和內(nèi)標(biāo)是混合在一起注入色譜柱的，因此只要混合溶液中被測組分與內(nèi)標(biāo)的量的比值恒定，上樣體積的變化不會(huì)影響影響定量結(jié)果。

內(nèi)標(biāo)法抵消了上樣體積，乃至流動(dòng)相、檢測器的影響，因此比外標(biāo)法精確。

在制作內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)注意什么?

在用內(nèi)標(biāo)法做色譜定量分析時(shí)，先配制一定重量比的被測組分和內(nèi)標(biāo)樣品的混合物做色譜分析，測量峰面積，做重量比和面積比的關(guān)系曲線，此曲線即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。在實(shí)際樣品分析時(shí)所采用的色譜條件應(yīng)盡可能與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)所用的條件一致，因此，在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，不僅要注明色譜條件(如固定相、柱溫、載氣流速等)，還應(yīng)注明進(jìn)樣體積和內(nèi)標(biāo)物濃度。在制作內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，各點(diǎn)并不完全落在直線上，此時(shí)應(yīng)求出面積比和重量比的比值與其平均位的標(biāo)準(zhǔn)偏差，在使用過程中應(yīng)定期進(jìn)行單點(diǎn)校正，若所得值與平均值的偏差小于2，曲線仍可使用，若大于2，則應(yīng)重作曲線，如果曲線在鉸短時(shí)期內(nèi)即產(chǎn)生變動(dòng)，則不宜使用內(nèi)標(biāo)法定量。

小結(jié)

內(nèi)標(biāo)法是一種間接或相對(duì)的校準(zhǔn)方法。在分析測定樣品中某組分含量時(shí)，加入一種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)以校準(zhǔn)和消除出于操作條件的波動(dòng)而對(duì)分析結(jié)果產(chǎn)生的影響，以提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確度。

內(nèi)標(biāo)物的選擇是個(gè)重頭戲，一定要把握住6大原則，否則很可能白忙活一場。


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• 詞條

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