酶聯(lián)*或化學(xué)發(fā)光*分析的對(duì)象包括有酶、蛋白、抗體、多肽、抗原、核酸、糖、脂質(zhì)等物質(zhì),其中酶、蛋白、抗體或多肽均屬于蛋白類分子,需要使用蛋白緩沖液來保護(hù)蛋白。 1.生物緩沖液,包括有Tris-HCl緩沖液、Tricine緩沖液、PB緩沖液、CB碳酸緩沖液等,其中Tris的緩沖體系應(yīng)用較為普遍,緩沖能力比較強(qiáng),同時(shí)對(duì)蛋白有良好的溶解性,為蛋白提供合適的pH環(huán)境。 2.鹽類,主要是氯化,調(diào)節(jié)蛋白緩沖液的離子強(qiáng)度(類似鹽濃度)。通常配制時(shí),需較少的離子強(qiáng)度防止蛋白沉淀;但需要將蛋白脫離出來時(shí),應(yīng)增加離子強(qiáng)度,否則蛋白難以沉淀脫離完全。對(duì)于有些蛋白,兩性離子的鹽類有助于蛋白結(jié)合。 3.表面活性劑:吐溫20、Triton X-100等,改變緩沖溶液表面張力,增加試劑相容性。 4.有時(shí)還需要添加糖類如蔗糖、海藻糖等,惰性蛋白如Casein(酪蛋白),防腐劑如疊氮、卡松(異噻唑啉酮混合物)等。 蛋白緩沖液選擇優(yōu)化 雖然蛋白緩沖液的基本組成類似,不過沒有通用的緩沖液,不同的系統(tǒng)必須分別優(yōu)化。不同的蛋白其合適的pH值、親水性、溶解性、穩(wěn)定性都有差異。另外,蛋白在緩沖液中越不穩(wěn)定,蛋白結(jié)合力越強(qiáng)。當(dāng)緩沖液pH與蛋白等電點(diǎn)相同時(shí),蛋白較不穩(wěn)定,*聚集沉淀。 蛋白緩沖液的穩(wěn)定作用 蛋白緩沖液中添加有糖,對(duì)包被蛋白的穩(wěn)定性有重要作用,減緩蛋白老化作用,并增加親水性;添加的表面活性劑也是增加蛋白的親水性,惰性蛋白也具有保護(hù)作用。在蛋白結(jié)合包被步驟中,需用沉淀劑(醇)降低蛋白的穩(wěn)定性,也可潤濕膜,減少膜帶有的靜電。 這里的蛋白在緩沖液中的穩(wěn)定與不穩(wěn)定是特定的,改變緩沖液的部分條件以優(yōu)化不同的蛋白處理步驟,前提都是不能使蛋白變性或失活。德晟是生物緩沖劑廠家,生產(chǎn)有Tris、Bicine、MOPS等多種緩沖劑。
詞條
詞條說明
蛋白印跡實(shí)驗(yàn)通常會(huì)在實(shí)驗(yàn)室中給人帶來挫敗感,想要獲得**的結(jié)果是一項(xiàng)艱苦的工作。而在嘗試可視化大分子量蛋白質(zhì)時(shí),難度會(huì)較大。在下文中,將給大家?guī)韼追N用于蛋白印跡實(shí)驗(yàn)中可使用的生物緩沖液。 蛋白印跡實(shí)驗(yàn)中對(duì)生物緩沖液的選擇是至關(guān)重要的,在下文將給大家?guī)砣N常見的生物緩沖液各自對(duì)蛋白印跡的作用,從而選擇出較適合的一款。 Tri's-甘氨酸具有堿性pH(8.6)和較短的保存期限,電泳時(shí)其pH值也會(huì)跟
1.**劑采血管(血清類采血管) 用干醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中,生化學(xué)、*學(xué),血清學(xué)、各種病毒檢測(cè)。微量元素檢測(cè),血庫檢查血液標(biāo)本的采集與盛裝。能較長時(shí)間維持血清的正常成分及利于血清的復(fù)檢,可重復(fù)性好。血塊完全收縮時(shí)間為1.5-2小時(shí), 離心轉(zhuǎn)速為3500-4000轉(zhuǎn)/分,離心時(shí)間5分鐘,建議貯存溫度4℃-25℃。 2.分離膠+采血管(血清類采血管) 用于血清生化學(xué)、*學(xué)、藥物檢測(cè)等,內(nèi)壁上均勻涂布促凝劑
現(xiàn)在普遍市面上的采血管被分為血液抗凝管和血液促凝管,不同的采血管所檢ce的項(xiàng)目也是完全不一樣的,而今天要說到的是采用了血清分離膠的采血管。市場(chǎng)上目前用量較大的紅色血清試管現(xiàn)在逐漸被黃色分離膠血清試管所替代,相對(duì)于紅色普通血清管,黃色分離膠血清管具有眾多優(yōu)點(diǎn):實(shí)現(xiàn)原管上機(jī)檢測(cè)而不用另轉(zhuǎn)移血清,縮減操作流程提高臨床實(shí)驗(yàn)室效率;可原管儲(chǔ)存血清標(biāo)本而不會(huì)影響*生化指標(biāo)?;谏鲜鰞蓚€(gè)優(yōu)點(diǎn),分離膠血清管深受
Hepes緩沖液用于細(xì)胞培養(yǎng)研究中需要注意什么?
HEPES是一種兩性離子**化學(xué)緩沖劑,二十個(gè)Good緩沖劑之一。在無細(xì)胞制劑的比較生物學(xué)分析中被證明**傳統(tǒng)緩沖液。它具有許多特性,使其非常適合作為組織培養(yǎng)基的緩沖劑,并且不需要特殊的環(huán)境即可保持正確的pH值。HEPES不結(jié)合二價(jià)陽離子,在0°C時(shí)可溶至2.25M。注意:由于DpKa /°C為-0.014,因此記錄在HEPES緩沖介質(zhì)中的pH值將隨介質(zhì)溫度成反比。 大多數(shù)組織培養(yǎng)基被碳酸氫鈉和5
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