市場(chǎng)上廣泛使用的病毒保存液主要有兩種,一種是以運(yùn)送培養(yǎng)基為基礎(chǔ)改良的病毒維持液,另一種則為核酸提取裂解液改良的保存液。
前者的主要成分是Eagle's基礎(chǔ)培養(yǎng)液(MEM)或Hank's平衡鹽,添加了病毒生存所需的鹽類、氨基酸、維生素、葡萄糖以及蛋白質(zhì),這種保存液使用紅鹽做為指示劑,溶液pH值在6.6-8.0時(shí)溶液呈粉紅色。保存液中添加了必須的葡萄糖、L-谷氨酰胺和蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)的提供形式有胎牛血清或牛血清白蛋白,可以穩(wěn)定病毒的蛋白質(zhì)外殼。
由于保存液營養(yǎng)成分豐富,有利于病毒的成活但是也有利于細(xì)菌的生長(zhǎng),如果保存液中污染了細(xì)菌,則會(huì)大量繁殖,其代謝產(chǎn)物中的會(huì)使保存液pH值下降,從粉紅色變?yōu)辄S色。因而大多數(shù)廠家都在配方中添加了抑菌劑成分,推薦使用的抑菌劑為青霉素、鏈霉素、慶大霉素及多粘菌素B等,不推薦使用疊氮、2--4-異噻唑啉-3-酮(MCI)和 5-氯-2--4-異噻唑啉-3-酮(CMCI)等抑制劑,因?yàn)檫@些組分對(duì)PCR反應(yīng)有影響。由于這種保存液提供的樣本基本是活病毒,可以較大程度保持樣本的原始性,后續(xù)不僅可以用于病毒的核酸提取檢測(cè),還能用于病毒的培養(yǎng)和分離。但是用于檢測(cè)時(shí)應(yīng)該注意的是必須滅活以后再進(jìn)行核酸提取純化。
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吖啶酯是一類化學(xué)發(fā)光試劑,其有多種型號(hào),吖啶酯與相關(guān)化合物被廣泛證明為優(yōu)質(zhì)的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物,吖啶酯的穩(wěn)定性以及檢測(cè)靈敏度都追趕放射性同位素和標(biāo)記特異性。根據(jù)取代基的不同,常用作化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的吖啶取代物分為兩類:吖啶酯和吖啶磺酰胺。它們的結(jié)構(gòu)中都有共同的吖啶環(huán)。 它們的發(fā)光機(jī)理相同:在堿性H2O2 溶液中, 分子受到過氧化氫離子進(jìn)攻時(shí), 生成不穩(wěn)定的二氧乙烷, 此二氧乙烷分解為CO2 和電子激發(fā)態(tài)
近期關(guān)于英國新冠病毒變異這個(gè)話題一直占據(jù)各大新聞媒體。倫敦的封城意味著什么呢?這都不是我們?cè)撽P(guān)心的問題,我們需要擔(dān)心的是病毒是否還在肆無忌憚的干擾著我們正常的生活。我們?cè)撛鯓尤ポ^好的保護(hù)自己遠(yuǎn)離病毒帶給我們的災(zāi)難?除了平時(shí)的勤洗手、少聚集等一些列措施外,我們較應(yīng)該做的事是找出這場(chǎng)疫情的元兇。而找出這場(chǎng)疫情的罪魁禍?zhǔn)字苯拥霓k法就是做核酸檢測(cè)。但作為核酸檢測(cè)的關(guān)鍵點(diǎn)就是樣本的采集與保存。因?yàn)槿绻麡颖静?/p>
病毒的檢測(cè)不同于常規(guī)的生化檢測(cè),病毒本身是一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的微生物,必須寄生在活細(xì)胞內(nèi)。采樣后,病毒離開寄主細(xì)胞,在采樣管內(nèi)其蛋白質(zhì)外殼和核酸都會(huì)很快降解,這樣核酸檢測(cè)時(shí)就無法判斷初始采集的樣本是否含有病毒,容易造成假陰性。所以我們要使用病毒保存液防止病毒的降解;同時(shí)還要防止病毒保存液長(zhǎng)霉菌的現(xiàn)象出現(xiàn)。1、滅活病毒保存液當(dāng)前核酸檢測(cè)是對(duì)樣本中的病毒RNA進(jìn)行檢測(cè),需要將病毒裂解,所以只要能保證病毒核酸
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