【病毒滅活試驗】滅活病毒保存液怎樣滅活和裂解病毒?

    滅活保存液是病毒保存液的一種,主要用于滅活病毒以防二次感染,這種病毒保存液的特點是能夠快速地滅活病毒,將病毒蛋白膜衣殼降解掉,同時將病毒核酸釋放出來,新冠病毒就是釋放和降解RNA病毒,這樣可以進行逆轉錄后PCR擴增實驗,達到利用核酸檢測病毒的目的。

    滅活型病毒保存液中除了含有裂解的成分,通常還含有使蛋白變性破壞膜結構的去污劑、生物緩沖劑還有防止核酸酶降解核酸的抑制劑,以及維持核酸結構穩(wěn)定的試劑等。裂解體系還可能加入蛋白酶,將蛋白切成小片段,促進蛋白質與核酸的分離。


    裂解病毒的方法有很多種,一般比較常見的兩種是加熱法和濃鹽法:

    濃鹽法是用高濃度的鹽可以破壞核酸與蛋白質之間的次級鍵,使核蛋白解聯(lián)從而把病毒核酸釋放出來。通常使用鹽酸胍、異硫氰酸胍或非胍鹽裂解鹽,可以直接裂解滅活病毒,不需要加熱處理樣本,簡便快捷

    加熱法是通過加熱到80℃~100℃的溫度值基礎上,因為一般樣本都是-70℃冷凍的,一般需要加熱5~10分鐘,這種操作比較簡單,只用一步就可以得到用于核酸PCR擴增的模板,不需要任何離心、抽提等操作步驟,比常用的CheleX100提取方法和苯酚/氯仿等方法要快。這種方法雖然簡單快捷,但是提取的核酸含量會比較少。



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    詞條說明

  • 病毒滅活效果試驗

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