溧水區(qū)涂料漆膜耐霉菌性測(cè)定 GB/T 1741-2020標(biāo)準(zhǔn)

時(shí)間：2022-03-17作者：江蘇廣分檢測(cè)技術(shù)有限公司瀏覽：409

一、范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了漆膜耐霉菌性試驗(yàn)所涉及的試驗(yàn)原理、儀器設(shè)備和材料、培養(yǎng)基和試劑、試驗(yàn)程序以及試驗(yàn)報(bào)告。本標(biāo)準(zhǔn)適用于建筑涂料漆膜耐霉菌性的測(cè)定，其他類(lèi)型漆膜耐霉菌性的測(cè)定可參考本標(biāo)準(zhǔn)。

二、規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是**的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其較新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB／T3186色漆、清漆和色漆與清漆用原材料取樣

GB／T6682—2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB／T9271—2008色漆和清漆標(biāo)準(zhǔn)試板

GB／T9278涂料試樣狀態(tài)調(diào)節(jié)和試驗(yàn)的溫濕度

GB／T23987—2009色漆和清漆涂層的人工氣候老化曝露曝露于熒光紫外線(xiàn)和水

YY0569—2011II級(jí)生物*柜

三、試驗(yàn)原理

模擬自然界霉菌生長(zhǎng)的環(huán)境條件，按霉菌生長(zhǎng)的生理特點(diǎn)設(shè)計(jì)加速試驗(yàn)。在試樣表面接種霉菌孢子，然后將試樣放置在適合霉菌生長(zhǎng)的環(huán)境條件下培養(yǎng)，觀察霉菌在試樣表面的生長(zhǎng)情況。根據(jù)試樣表面長(zhǎng)霉程度對(duì)漆膜的耐霉菌性進(jìn)行評(píng)定分級(jí)。

四、儀器設(shè)備和材

1、恒溫恒濕培養(yǎng)箱：控溫范圍10°C～50°C，溫度均勻性不**過(guò)±2°C，溫度波動(dòng)度不**過(guò)±1°C，相對(duì)濕度范圍50％～95％，精度5％。

2、生化培養(yǎng)箱：控溫范圍5°C～50°C，溫度均勻性不**過(guò)±2°C，溫度波動(dòng)度不**過(guò)±1°C。

3、高壓蒸汽滅菌鍋：控溫范圍101°C～137°C，溫度均勻性不**過(guò)±2°C，溫度波動(dòng)度不**過(guò)±2°C。

4、干熱滅菌箱：控溫范圍50°C～200°C，溫度均勻性不**過(guò)±2°C，溫度波動(dòng)度不**過(guò)±2°C。

5、天平：實(shí)際分度值犱＝10mg、犱＝1mg、犱＝0．1mg。6、pH計(jì)：分度值0．01。

7、離心機(jī)：轉(zhuǎn)速500r／min～5000r／min。

8、生物*柜：符合YY0569—2011規(guī)定的II級(jí)生物*柜要求。

9、顯微鏡：普通光學(xué)顯微鏡。

10、冰箱：控溫范圍4°C～10°C，溫度均勻性不**過(guò)±2°C，溫度波動(dòng)度不**過(guò)±2°C。

11、噴霧器：容量為30mL。

12、量筒：容量為10mL、50mL、100mL、500mL和1000mL。

13、培養(yǎng)皿：直徑90mm。

14、血球計(jì)數(shù)板。

15、三角瓶：容量為125mL、500mL。

16、接種環(huán)。

17、玻璃珠：粒徑3mm～7mm。

18、玻璃漏斗。

19、纖維濾紙：定性纖維濾紙。

20、燒杯：容量為500mL和1000mL。

21、無(wú)色玻璃試管：規(guī)格10mm×180mm。

五、培養(yǎng)基和試劑

1、一般要求除另有規(guī)定外，所有試驗(yàn)均使用化學(xué)純或化學(xué)純以上的試劑和符合GB／T6682—2008中三級(jí)水要求的蒸餾水或去離子水。

2、無(wú)菌水準(zhǔn)確稱(chēng)取0．005g分散劑（如吐溫80）加入到100mL水中攪拌均勻，按10mL／支分裝到無(wú)色玻璃試管（5．21）中，放入高壓蒸汽滅菌鍋（5．3）中在（121±2）°C條件下滅菌20min后備用。

3、營(yíng)養(yǎng)鹽溶液，組分見(jiàn)表1

表1營(yíng)養(yǎng)鹽溶液組

制備方法

按表1在燒杯中準(zhǔn)確稱(chēng)取營(yíng)養(yǎng)鹽溶液組分，用水加熱溶解后，加水至1000mL，用0.1mol／L溶液調(diào)節(jié)pH值為6.0～6.5，用三角瓶分裝后置于高壓蒸汽滅菌鍋中在（121±2）°C條件下滅菌20min后備用。

營(yíng)養(yǎng)鹽瓊脂培養(yǎng)基

準(zhǔn)確稱(chēng)取20.0g瓊脂到1000mL未滅菌的營(yíng)養(yǎng)鹽溶液中，加熱攪拌熔化，用0.1mol／L溶液調(diào)節(jié)pH值為6.0～6.5，用三角瓶分裝后置于高壓蒸汽滅菌鍋中在（121±2）°C條件下滅菌20min后備用。馬鈴薯-葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）及組分見(jiàn)表2。

表2馬鈴薯-葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）組分

取新鮮無(wú)霉?fàn)€的馬鈴薯，去皮切片，準(zhǔn)確稱(chēng)取300.0g，加入600mL水煮沸20min后過(guò)濾，取汁液。按表2稱(chēng)取準(zhǔn)確其余組分，加入到汁液中煮沸溶解，加水至1000mL，用無(wú)色玻璃試管分裝，置于高壓蒸汽滅菌鍋中，在（121±2）°C條件下滅菌20min，趁熱取出試管并傾斜擺放，自然凝固成斜面后備用。也可用馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）商品培養(yǎng)基，按照產(chǎn)品標(biāo)簽要求制備。

六、試驗(yàn)程序

1、混合孢子液的制備

1．1試驗(yàn)菌種

耐霉菌性試驗(yàn)所用菌種見(jiàn)表3。經(jīng)有關(guān)方商定后，可增加其他試驗(yàn)菌種。

表3漆膜耐霉菌性試驗(yàn)菌

1.2菌種培養(yǎng)及保藏

在生物*柜內(nèi)用無(wú)菌接種環(huán)分別接種各種菌種（表3）于馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）上，在生化培養(yǎng)箱中，于28°C～30°C條件下培養(yǎng)至斜面長(zhǎng)滿(mǎn)霉菌孢子，培養(yǎng)后置于3°C～10°C條件下保藏，時(shí)間不**過(guò)3個(gè)月。

1.3混合霉菌孢子液的制備

在生物*柜內(nèi)用無(wú)菌接種環(huán)挑取霉菌孢子，接種于馬鈴薯-葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）上，在28°C～30°C條件下培養(yǎng)7d～14d，當(dāng)培養(yǎng)基表面長(zhǎng)滿(mǎn)霉菌孢子時(shí)，加入10mL無(wú)菌水，在生物*柜內(nèi)用無(wú)菌接種環(huán)在無(wú)菌操作條件下輕輕地刮取霉菌培養(yǎng)物表面的霉菌孢子，制成霉菌孢子懸浮液。將霉菌孢子懸浮液倒入125mL帶有塞子并預(yù)先裝有45mL無(wú)菌水和10個(gè)～15個(gè)無(wú)菌玻璃珠的無(wú)菌三角瓶中，用力振蕩無(wú)菌三角瓶以打散孢子團(tuán)并使霉菌孢子從子實(shí)體中釋放出來(lái)。將帶有無(wú)菌纖維濾紙的無(wú)菌玻璃漏斗置于無(wú)菌三角瓶上，把振蕩后的霉菌孢子懸浮液倒入無(wú)菌玻璃漏斗內(nèi)過(guò)濾，除去菌絲和培養(yǎng)基碎片。無(wú)菌條件下以4000r/min的速度離心已過(guò)濾的霉菌孢子懸浮液，去掉上清液，加入10mL～50mL無(wú)菌水于孢子沉淀物中，充分混勻，然后離心得到霉菌孢子沉淀物，重新加入無(wú)菌水混勻，再次離心得到霉菌孢子沉淀物。將霉菌孢子沉淀物用營(yíng)養(yǎng)鹽溶液稀釋?zhuān)醚蛴?jì)數(shù)板或其他方法測(cè)定霉菌孢子濃度，并稀釋使懸浮液中霉菌孢子濃度為0.8×106個(gè)／毫升～1.2×106個(gè)／毫升。制備好的每種霉菌孢子懸浮液可在4°C～10°C冰箱中保存不**過(guò)4d，試驗(yàn)前將制備的每種霉菌孢子懸浮液等體積混合，獲得混合霉菌孢子液。

2、樣品

產(chǎn)品按GB/T3186規(guī)定取樣，取樣量根據(jù)檢驗(yàn)需要確定。

3、試樣的準(zhǔn)備

3.1、試驗(yàn)樣品除另有規(guī)定外，采用鋁板、玻璃板等不易生銹和吸潮的底材，尺寸為50mm×50mm，厚度至少為1mm。

除另有規(guī)定外，按GB/T的規(guī)定處理每一塊試板，鋁板等金屬底材可用合適的砂紙打磨。然后按產(chǎn)品的規(guī)定施涂及養(yǎng)護(hù)3塊試板作為試驗(yàn)樣品。室外用產(chǎn)品試驗(yàn)樣品的漆膜在耐霉菌性試驗(yàn)前按GB/T中8.2.1的規(guī)定進(jìn)行老化試驗(yàn)，輻照度為0.83W·m－2·nm-1，試驗(yàn)時(shí)間為100h。除另有商定外，試驗(yàn)前試驗(yàn)樣品應(yīng)在GB/T9278規(guī)定的條件下至少調(diào)節(jié)4h。

3.2、對(duì)照樣品3張尺寸為（50×50）mm的無(wú)菌纖維濾紙。

4、接種培養(yǎng)

4.1、培養(yǎng)皿法

向無(wú)菌培養(yǎng)皿中倒入約20mL營(yíng)養(yǎng)鹽瓊脂培養(yǎng)基，當(dāng)培養(yǎng)基凝固后，在無(wú)菌條件下，將3個(gè)試驗(yàn)樣品和3個(gè)對(duì)照樣品分別放置在裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿表面*。用無(wú)菌噴霧器向每個(gè)試驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品表面和培養(yǎng)基表面均勻噴灑0.4mL～0.6mL混合霉菌孢子液，使整個(gè)試驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品表面和培養(yǎng)基表面濕潤(rùn)。將已接種的試驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品置于恒溫恒濕培養(yǎng)箱中，在溫度25°C～30°C、相對(duì)濕度不**85％的條件下培養(yǎng)7d后目視檢查對(duì)照樣品上霉菌生長(zhǎng)情況，3個(gè)對(duì)照樣品均應(yīng)有霉菌生長(zhǎng)，否則試驗(yàn)無(wú)效，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。若每個(gè)對(duì)照樣品上均可見(jiàn)霉菌生長(zhǎng)，則繼續(xù)培養(yǎng)試驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品至28d后按下列進(jìn)行結(jié)果評(píng)定。經(jīng)有關(guān)方商定，可以延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間至56d。

4.2、懸掛法本方法適用于大件試驗(yàn)樣品、不規(guī)則試驗(yàn)樣品和無(wú)法用培養(yǎng)皿法測(cè)試的試驗(yàn)樣品。把準(zhǔn)備好的混合霉菌孢子液，分別接種于3個(gè)試驗(yàn)樣品和3個(gè)對(duì)照樣品的表面。將已接種的試驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品在室溫下晾干10min～30min，懸掛在帶有緊密蓋子、能放置試驗(yàn)樣品的玻璃或塑料容器內(nèi)。容器的大小與形狀應(yīng)使得在它內(nèi)部空間的底部具有足夠敞露的水表面積，保證放置的樣品有足夠的空間，不相互接觸干擾，并保持容器內(nèi)相對(duì)濕度大于85％。懸掛好的樣品應(yīng)確保不被水觸及或?yàn)R到。把懸掛已接種試驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品的容器放在恒溫恒濕培養(yǎng)箱中，在溫度25°C～30°C，相對(duì)濕度不**85％的條件下培養(yǎng)7d后目視檢查對(duì)照樣品上霉菌生長(zhǎng)情況，3個(gè)對(duì)照樣品均應(yīng)有霉菌生長(zhǎng)，否則試驗(yàn)無(wú)效，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。若每個(gè)對(duì)照樣品上均可見(jiàn)霉菌生長(zhǎng)，則繼續(xù)培養(yǎng)試驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品至28d后進(jìn)行結(jié)果評(píng)定。經(jīng)有關(guān)方商定，可以延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間至56d。

七、結(jié)果評(píng)定

培養(yǎng)結(jié)束后，將試驗(yàn)樣品從恒溫恒濕培養(yǎng)箱取出，應(yīng)先目視檢查，長(zhǎng)霉面積占比小于10％時(shí)用顯微鏡放大50倍觀察，按表4評(píng)定耐霉菌性等級(jí)。結(jié)果以至少兩塊樣板的級(jí)別一致為準(zhǔn)，若任意兩個(gè)平行試樣的耐霉菌性等級(jí)相差兩個(gè)及以上等級(jí)時(shí)應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。

表4耐霉菌性等級(jí)


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