游離DNA如何提取

時間：2022-04-11

BIOG產(chǎn)品特點
◎操作簡便快速，可在半小時內(nèi)獲得理想的DNA；
◎提取DNA純度高，無抑制劑，A260/A280為1.7-1.9；
◎產(chǎn)量較高，較國內(nèi)同類產(chǎn)品高出20%；
◎可用于中量（0.5-1.5mL）血清、血漿、胸腹水、腦脊液、滑膜液、水樣等液體樣本中游離DNA的提取；
◎不含苯酚和氯仿等有毒溶劑，安全無毒。
BIOG操作步驟
1. 請自行準備：無水乙醇、15mL離心管。
2. 取出洗滌液，按以下操作：
a) 洗滌液A：31.5mL加入13.5mL無水乙醇，混勻；63mL加入27mL無水乙醇，混勻。
b) 洗滌液B：13.5mL加入31.5mL無水乙醇，混勻；27mL加入63mL無水乙醇，混勻。
c) 配制好的洗滌液如出現(xiàn)沉淀，可在37℃溶解，搖勻后使用。
3. 取15mL離心管（自備），加入1500μL樣本，30μLDNA Carrier混合均勻，加入1500μL 裂解液及150μL 消化液，振蕩混勻，56℃水浴10 分鐘。
4. 加入6000μL無水乙醇，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響DNA的提取與后續(xù)實驗。
5. 將吸附柱放入收集管內(nèi)，將4590μL上述溶液轉(zhuǎn)入吸附柱內(nèi)，靜置2 分鐘，8,000 rpm離心2分鐘，棄收集管內(nèi)廢液；
6. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，將剩余4590μL溶液轉(zhuǎn)移至吸附柱內(nèi)，重復步驟5。
7. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，加3750μL 洗滌液A至吸附柱內(nèi)，8,000 rpm離心2分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。
8. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，加3750μL 洗滌液B至吸附柱內(nèi)，靜置2 分鐘，8,000 rpm離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。
9. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，8,000 rpm 離心2 分鐘，離去殘留的洗滌液。
10. 取出吸附柱，放入新的15 mL收集管內(nèi)，加入70μL 洗脫液(注意將洗脫液均勻加在吸附膜的中間和四周)，靜置3 分鐘，8,000 rpm離心3 分鐘，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步實驗或-20℃保存。
注意事項：
1. 裂解液、洗滌液含有刺激性化學物質(zhì)，操作過程請做好防護措施，避免直接接觸皮膚，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮膚或眼睛，請立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時請就醫(yī)。2. 裂解液如有白色絮狀物析出屬正?，F(xiàn)象，置于 37℃水浴中溶解即可。

詞條
詞條說明
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