水樣濾膜

時(shí)間：2020-01-05作者：深圳市安必勝科技有限公司瀏覽：731

作者：Suzanne kennedy 來源：美國MoBio實(shí)驗(yàn)室

跟研究水樣的科學(xué)家聊天的時(shí)候，他們常常提到，過濾提取水樣DNA、RNA很不容易。因?yàn)樗鼈兾⑸镓S度低（似乎水源情況）而且珍貴。

為什么說做水樣微生物分子生物學(xué)研究不容易？

對(duì)于許多研究者來說，不可能做到幾個(gè)月或者幾年一次地經(jīng)?；氐剿吹胤磸?fù)采樣。比如南極、波羅的海深海熱泉。有些是收集特定事件發(fā)生后的水樣，如洪水、暴雨。水樣環(huán)境每個(gè)星期甚至每天都不一樣。所以，他們需要從每個(gè)樣品中獲得準(zhǔn)確的微生物信息。

選擇濾膜：

對(duì)于研究濾膜上過濾水樣的微生物多樣性，較好的濾膜直徑47mm的。這個(gè)尺寸水既容易過濾，又能滿足DNA、RNA的提取需求。直徑太小（25mm）的濾膜容易堵塞，太大（147mm）則需要剪碎以適應(yīng)5ml或15ml標(biāo)準(zhǔn)管子。事實(shí)上，對(duì)水樣濾膜額外處理越少，越能回收到更多微生物DNA和RNA。

MOBIO實(shí)驗(yàn)室使用了一個(gè)5ml螺紋tube管（如左圖），為大家展示47mm濾膜高效提取而*剪碎。該研磨管允許石榴石研磨珠充分接觸濾膜過濾面。經(jīng)過大量徹底研究，還發(fā)現(xiàn)此研磨管能較大限度回收所有類型濾膜的DNA。

 

 

 

 

 

 

另一個(gè)常遇到的問題是，如何選擇濾膜類型。濾膜有很多種，如聚醚砜濾膜、混合纖維素酯薄膜、氧化鋁薄膜等。每種薄膜的使用方法不一，在提取的時(shí)候會(huì)得到截然不同的結(jié)果。薄膜的理化特性也決定了其應(yīng)用范圍。當(dāng)然，對(duì)于提取DNA和RNA，孔徑大小、水樣過濾量、抑制因子（如殺蟲劑）吸附能力等因素較為重要。換句話說，你有很多種濾膜可選擇。

我們的使用經(jīng)驗(yàn)：

聚醚砜濾膜（Polyethersulfone）：

較結(jié)實(shí)的濾膜之一，可以過濾比其它濾膜更多的水樣。使用真空泵可快速抽干，易于折疊不易撕破。能抵受真空泵長時(shí)間高壓力的濾過。若需要過濾大量低微生物含量的清亮水樣，0.22mm濾膜的較合適。在提取核酸時(shí)，得率可與PowerWater? DNA 和RNA Isolation Kits中自帶的混合纖維素酯濾膜相媲美。

混合纖維素酯濾膜（膜纖維素、纖維素）:

0.45μm孔徑較合適材質(zhì)。如果你的水樣渾濁，使用0.22μm濾膜過濾緩慢容易堵塞時(shí)，建議使用0.45μm孔徑的濾膜。纖維素濾膜吸水性強(qiáng)，不好處理。貼一個(gè)我們實(shí)驗(yàn)室做的演示視頻。

有文獻(xiàn)顯示殺蟲劑和除草劑很容易吸附到纖維素濾膜上。若你的樣品含有殺蟲劑和除草劑，較好避免使用這類濾膜。

聚碳酸酯濾膜（Polycarbonate）:

這種濾膜很薄且容易起褶皺，所以不太好用。通常用0.45μm孔徑的濾膜來預(yù)防過濾時(shí)發(fā)生阻塞。不像聚醚砜膜（PES）和混纖膜（MCE），水樣中微生物會(huì)停留在濾膜表面。使得濾膜很容易阻塞，本該濾過的小顆粒也會(huì)截留下來。實(shí)驗(yàn)證明，珠磨研磨破碎強(qiáng)度越小，獲得DNA分子量越大。如果你的樣品只是用來做PCR，可以采用強(qiáng)力的研磨方法提高得率，暫時(shí)忽略片段破碎。

氧化鋁（Aluminum Oxide）:

這類濾膜又稱為Anodisc?過濾膜（Whatman）。手感接近于薄片玻璃，任何類型研磨珠都能輕易破碎。很多實(shí)驗(yàn)室不愿意使用，因?yàn)椴缓梅湃氲?/span>Tube中保存。通常用于微生物量少的海水。有0.45μm和0.22μm孔徑規(guī)格。像聚碳酸酯濾膜一樣微生物細(xì)胞大多停留在濾膜表面多于陷入濾膜內(nèi)，較利于DNA和RNA的提取，不過珠磨研磨時(shí)會(huì)增加核酸片段的剪切。

如何折疊濾膜：

大部分人折疊濾膜放進(jìn)Tube管的操作已經(jīng)非常嫻熟了。對(duì)于新手，我們提供了一個(gè)演示視頻。視頻中操作的是一個(gè)0.45μm的混合纖維素酯濾膜。操作者是PowerWater? kit的**Heather Callahan博士，由技術(shù)總監(jiān)Nik von Atzigen解說 (請(qǐng)聯(lián)系QQ：854520684索取視頻文件）。

我們深知提取環(huán)境水樣不好做，獲取每滴水中的DNA、RNA也同樣非常重要。所以在開發(fā)PowerWater?和RapidWater? 產(chǎn)品的時(shí)候，從研磨用的Tube管、研磨珠的選擇、去抑制因子的溶液、吸附溶液、沖洗溶液到最后的洗脫，我們盡可能優(yōu)化到每一個(gè)步驟。我們的目的是盡量讓你每一步都能夠做成功。如果你有任何關(guān)于水樣DNA、RNA提取方面的問題，請(qǐng)告訴我們。

相關(guān)產(chǎn)品：

PowerWater? DNA Isolation Kits、RapidWater? DNA Isolation Kits、 PowerWater? RNA Isolation Kits

 


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