水樣濾膜的保存

時間：2020-01-05作者：深圳市安必勝科技有限公司瀏覽：1360

作者：Suzanne kennedy 來源：美國MoBio實驗室

較近收到很多咨詢，關(guān)于為了方便日后提取DNA，如何保存從海灣油污染海域收集到的水樣濾膜。本文將與大家分享MOBIO這方面的研究心得。下面是來自佐治亞州大學一位研究人員發(fā)來的郵件以及我們給出的回覆。

問題:

這周末我們將前往墨西哥灣和佛羅里達群島收集水樣用于微生物分析。因此想了解，如何保存過已過濾水樣的濾膜，方便后續(xù)使用你們的PowerWater Kit提取DNA。在野外，我們只能對水樣先過濾，再把濾膜帶回實驗室進行下一步提取操作。由于野外條件有限，是否有不依賴冷凍的保鮮方法？是否兼容后續(xù)提取？這是我們最后一次采樣，希望能盡量用好收集到的材料。

謝謝！

Heather Callahan 博士回覆

您好！根據(jù)去年以來我做的DNA、RNA相關(guān)實驗，給出下面的建議。

這些建議經(jīng)過修改可以用于保存Sterivex unit或者我們的平底過濾膜。

酒精在這種場合起不了作用。經(jīng)驗證明，無論用70%或者**酒精，結(jié)果只能使得核酸大量丟失甚至完全降解。

清亮水樣

干凈水樣的濾膜可以干燥后室溫或-20℃冷凍保存在研磨管中（或sterivex unit中）。

冷凍干燥條件下濾膜上的DNA和RNA通常都很穩(wěn)定。使用平的過濾濾膜時，這么處理是較省事的。因為，回到實驗室后可直接加入裂解緩沖液進行后續(xù)處理，*轉(zhuǎn)移濾膜。對于使用Sterivex的，可用PowerWater? Sterivex? DNA Isolation Kit，*剪開過濾器取濾膜。

渾濁或者受污染水樣

渾濁或受污染水樣過濾濾膜也可以干燥保存在PowerWater的研磨管中。4℃保存條件下的樣品，得到的DNA完整性比室溫保存的較好。為了獲得高質(zhì)量DNA，短期室溫較多只保存3天，若干燥冷凍可長期保存。

我們也測試了LifeGuard Soil Preservation Solution對濾膜DNA、RNA的保護。對于渾濁樣品，能有效減少核酸降解。加入2-4ml LifeGuard到裝有已過濾水樣濾膜的研磨管中，浸潤濾膜為度。4℃或較低溫度長期保存（＞一周）。

處理使用LifeGurad保存水樣濾膜前，先離心。盡可能吸掉保護液，避免其過分稀釋裂解緩沖液。另，為了使保護液盡可能去除，也可以把濾膜與研磨珠分開保存。

含大量金屬離子水樣

有些取自酸性礦洞或者地下洞穴的樣品，腐植酸含量不高，卻有可能含有大量金屬離子。從PowerWater DNA Isolation Kit使用者反饋的信息可了解到，試劑盒所采用的IRT技術(shù)足可以完全去除金屬離子并獲得高質(zhì)量PCR等級的DNA。

最后

每個項目具體情況各異，如果你對手上的樣品了解不多，可聯(lián)系我們。我們會根據(jù)多年經(jīng)驗給出合適建議。你可以采取不同辦法，看怎么操作較適合你的樣品。

關(guān)于如何選擇過濾膜，請關(guān)注下一篇較新的文章。

 


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